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乾貨分享|慢病毒包裝與純化實驗操作+視頻
慢病毒(Lentivirus)是逆轉錄病毒的一種。在研究RNAi方面,慢病毒技術是最為有效的一種解決方案。1)直接包裝成為假病毒顆粒,對分裂和非分裂細胞均有感染作用,適合RNAi研究和體內實驗中難於轉染的細胞(比如神經元細胞、幹細胞或其他原代細胞)。2)可以通過簡單方式,在短時間內獲得穩定表達特定基因的多種細胞株。
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慢病毒系統工作原理
病毒酶蛋白Gag和Pol:這些病毒蛋白是病毒粒子的成熟所需要的。Tat和Rev上調轉錄活性和核轉運RNA基因組。這些附屬基因已被剔除以減少重組發生的可能性和增加安全性(見下文安全性一節) [11] 。在新一代的慢病毒系統中,Tat已被剔除,Rev被置於一個單獨的載體上以增加安全性。
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快速、簡便濃縮慢病毒顆粒解決方案
在構建表達載體的時候 ,我們要如何選擇合適自己實驗需要的載體呢?載體可分為病毒載體和非病毒載體,病毒載體又分為慢病毒載體、腺病毒載體和腺相關病毒載體等。下面來說說病毒載體中的慢病毒載體。一、慢病毒逆轉錄病毒(Retrovirus):是一種RNA病毒,在複製時需在逆轉錄酶的作用下首先將RNA轉變為cDNA, 再在DNA複製、轉錄、翻譯等蛋白酶作用下擴增。主要包括RNA腫瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三種亞科。
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超詳細的慢病毒包裝攻略
高效轉染病毒源井生物可以提供不同質量標準的慢病毒,腺病毒,腺相關病毒。在基因編輯方面,源井生物可以提供體外細胞感染用的濃縮病毒,也可以提供動物體內使用的超純化病毒,滿足客戶的不同科研需求。三種病毒的比對:慢病毒包裝原理慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷1型病毒)為基礎,使用皰疹病毒VSVG外殼蛋白發展起來的工具載體。其毒性基因已經被剔除並被外源性目的基因所取代,屬於假型病毒。
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如何做好慢病毒載體實驗?跟著我試一下
最早的慢病毒載體是攜帶轉基因的具有複製能力的病毒。為了使這些載體更安全,通過一系列修飾將 HIV 載體進化為將病毒包裝和生產所需的序列與編碼病毒蛋白的序列分開的形式。下面小編簡單為大家介紹第一到第三代慢病毒載體系統到底是咋回事。
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慢病毒包裝步驟及注意事項
此外,也有使用其它幾類慢病毒包裝細胞系製備慢病毒載體。 瞬時轉染製備慢病毒: 細胞:慢病毒包裝常用人胚腎細胞(HEK, human embryonic kidney)293T,其含有SV40病毒的大T抗原蛋白編碼基因,轉染效率極高。但其貼壁性不好,所以需要使用多聚賴氨酸包被的培養皿增加其吸附性。
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慢病毒感染目的細胞時困難重重,咋整?
,可實現目的基因長時間穩定的表達,不隨著細胞分裂傳代而丟失安全性高,未發現致病性,已被用於 CAR-T 治療作用於人體免疫原性低,直接注射活體組織不易造成免疫反應,適用於動物實驗使用吉凱慢病毒產品發表的文獻(部分)1.
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慢病毒大規模生產的下遊工藝
下遊工藝由一系列的工藝步驟組成,目的是去除所有這些汙染物,濃縮收穫液體積,同時維持慢病毒活性,而主要挑戰是大體積料液的處理以及工藝過程中病毒功能性的損失。為保持載體活性,縮短工藝時間並減少工藝步驟數將是關鍵。用於小規模濃縮和純化的方法和工藝單元通常不適用於大規模處理。
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又是輔助又是穿梭,慢病毒包裝到底是個什麼鬼?
提起慢病毒包裝,好多人只知道按著實驗室protocol上寫的質粒共轉染293T細胞
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慢病毒大規模生產面臨的挑戰
目前已有研究在攪拌式生物反應器和波浪式生物反應器中通過瞬時轉染懸浮HEK293細胞成功生產慢病毒。且研究表明懸浮體系與傳統貼壁體系的慢病毒滴度相當,在106-108TU/ml (Segura et al., 2007; Ansorge et al.,2009)。要配合更大規模的慢病毒生產,還需要下遊的加工技術和質量分析進一步保障。
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Henry為開餐廳偷跑回臺灣學習:留學生想家時,可以到小站坐坐
他近期有了新身份,在江南區經營臺式餐廳「小站」,身為老闆的他接受採訪時坦言:在韓國生活10年半,從以前就一直想吃臺灣小吃,我找了10幾年。思念家鄉菜的味道,讓他有了開餐廳的想法。▲Henry接受《ETtoday》獨家專訪,透露曾經為了餐廳跑完臺灣研究食譜。
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小站想要始發列車,就要充值
一、什麼叫充值對於鐵路上的小站來說,因為人口、經濟比不上大城市,即使開通了客運,車次也不會很多,更不要說挑出行的車次了,到北京、上海這種大城市能有一趟車就已經很不錯了,至於哪一個車次基本上是看鐵總的心情了。要想停靠的車次多,甚至拿到始發車次,基本只能靠地方政府財政補貼,官方說法是「政府購買公共服務」,俗稱「充值」。
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寓教於樂 海綿城市科普小站走進社區
11月27日-29日,由深圳市海綿城市建設工作領導小組辦公室主辦的 「海綿城市科普小站」活動在南山區大衝城市花園開展。為了能讓社區居民更直觀的理解海綿城市的概念,本次「海綿城市科普小站」共設置了4個版塊,分別為「海綿城市基本概念」「海綿城市設施模型靜態品鑑」「海綿城市科普視頻展播」「深圳典型海綿城市項目介紹」,在動靜之間,觸動居民對海綿城市的理念印象更深刻。工作人員通過現場答疑解惑、海綿設施互動試驗等方式,傳播海綿城市理念,為居民講解「海綿城市」建設理念、意義和好處等。
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利用慢病毒感染構建穩定敲低Atg5基因的RAW 264.7細胞系
慢病毒載體:作為介導RNA幹擾基因表達的新型載體,具有一系列的優點。目的:利用慢病毒感染的方法構建穩定敲低Atg5基因的RAW 264.7巨噬細胞系,為研究巨噬細胞自噬和免疫炎症相關疾病及其發生機制提供底盤細胞。
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萬裡鐵道線上的偏僻小站:一個人的孤獨和堅守
往往工作和生活著一些寂寞的人在他們中間有的人甚至獨自堅守一座小站孤獨到底是什麼滋味?「孤獨」是對我們最大的考驗,特別是新來的職工,都得過「孤獨」這一關,職工的上下班和日常進出只能依靠每天一趟的「小慢車」。車站雖小,責任重大。這條線是國際幹線,每周都有國際旅客列車以及中歐班列通過,每當看到這些列車平安通過站區,我們心中的自豪感油然而生。
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【分子克隆專題】第十一期:慢病毒載體
慢病毒的產生和轉導如上圖步驟|,用包膜、轉移和包裝載體轉染慢病毒包裝細胞系。包膜、轉移和包裝載體轉錄的mRNA分別被翻譯成:通過內質網進入細胞膜的病毒包膜蛋白(2a);單鏈RNA病毒基因組(2b);病毒結構蛋白和酶(2c),這三種成分組裝成病毒顆粒,從宿主細胞膜上出芽。
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紅豆Live牽手小站教育 打造多元化留學英語直播課程
,紅豆Live將成為小站教育的外部獨家直播平臺。從左至右:紅豆Live聯合創始人趙作陽、小站教育創始人兼CEO王浩平、小站教育合伙人兼副總裁「雅思天后」劉薇、微博教育拓展負責人佟振 小站名師入駐紅豆Live 推出多元化留學語培課程 在線教育一直是紅豆Live重點探索的重要領域之一,在2016年11月,紅豆Live就與小站教育展開初步合作,小站教育合伙人兼副總裁「雅思天后
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國際疫情|病毒獵手利普金:英美對疫情的反應一開始就慢了
都知道利普金教授素來有著「病毒獵手」之稱,其感染不可避免令人再次感受到新冠病毒的威脅。21日《金融時報》刊登了對利普金的採訪,採訪中利普金直言「我們現在處於困境中」,美國對疫情的反應從一開始就慢了,英國也是,這些國家的人民也因為此付出了極高的代價。德國方面之所以能夠控制疫情並保持低病亡率,歸根結底同他們第一時間就進行檢測和遏制擴散有關。
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生命之花常開不敗,二人小站書寫沙漠傳奇
居延海站,是這條鐵路上的一個五等小站,站雖小,作用卻很大。會有大量的原煤經這個小站運往國內。在無人區內,可以看到兩個身影穿梭在鐵軌與小站之間,他們日復一日,做著相同的工作。付澤民經常是在接收到命令以後,便會拿起掃把和鐵鍬去排除故障。在極端惡劣的條件下,他每天要忍受著不斷揚起的風沙,忍受著寂寞。在春運期間,他們甚至連著好幾個晚上無法睡踏實安穩的覺!
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宣傳愛鳥護鳥理念 國內首個「勺嘴鷸小站」落戶如東
近年來,如東縣通過與多所學校共同打造勺嘴鷸「教室+小站」的方式,向社會宣傳愛鳥護鳥理念,主動參與到保護生態環境的行動中來。近日,在觀鳥愛好者的帶領下,20多名小學生來到了南通市中小學生素質教育實踐基地。