根據最近的反饋，大家對焦磷酸測序的一些注意事項還不太了解，一個個解釋太累了，還是匯總一下，希望大家能認真的看。
一、樣本製備
焦磷酸測序對樣本量要求不高，
1、濃度30ng/ul，其實幾個ng也可以，只是濃度達標了成功率高些，平時的石蠟切片，糞便裡的細胞等提取的DNA，其實都可以做的，所以大家不用太在意濃度，但送樣時需要交代清楚（我們會根據濃度採用不同擴增方法）。
2、純度1.8左右（這個是硬性規定），雜質多會對實驗有影響。
3、體積一般要達到30ul，主要是怕管壁容易粘著，體積越少越容易損失，用量其實不多，多餘的樣本都會返還（除非客戶發郵件確定樣本不要了），不用擔心樣本會丟掉。
二、評估流程
1、客戶需要提供的信息
a、物種類型（方便我們查找序列）或者直接提供序列標記出需要做的CG位點
如果是晶片驗證，則提供晶片版本號以及對應的資料庫版本、位點編號、染色體編號
b、樣本數和基因數或者位點數（樣本太少一般不接的，湊板難湊齊，人工費也耗費的多），特別是基因數多，位點少的，客戶也不划算，因為測序沒幾個，就光給合成引物了，引物費貴（修飾引物）
c、樣本類型（比如石蠟切片，樣本類型不同，評估的方式也不一樣）
d、提供以上信息後，我們會評估（流程見上一篇），評估後客戶根據自己需要，選擇相應的片段來做。
e、確定好樣本個數，所要做的基因片段或者位點，請提供給我們單位信息、開票所需的資料，我們做好合同，開票（預付60%）到款後開工（或者打個人押金立即開工，款到後退還押金）。
三、費用計算
計算公式：
引物費=引物套數*引物單價
亞硫酸鹽處理費用=樣本個數*亞硫酸鹽處理單價
測序費用=樣本個數*引物套數*測序單價
以上三項費用合計起來就是總價
備註：
1、測序平臺有Q96與Q48，評估出來是哪個平臺，就按哪個測序單價計算。
2、測序單價是按總反應數梯度價進行選擇，如果樣本有95個，有2套引物，一套適合Q96（常規款），另一套適合Q48（最新款，測序長度更長，上樣量更低，可以測更多結構），分別單獨計算，不能兩個平臺都按95*2的價格計算，只能單獨按95個反應計算。
3、請不要還價，我們沒有銷售，已經把價格壓到最低了，如果希望價格低，那只能多些反應數，按照梯度價格表了。全部用的qiagen的試劑，試劑成本大家都可以在qiagen官網查詢，再包括人工，房租，水電，儀器折舊，稅，利潤所剩無幾了，我們也就是賺個人工費，希望大家諒解。
另外也不要覺得比誰家貴一點點，qiagen的亞硫酸鹽處理試劑盒是可以保存半年左右，很多老師都是陸陸續續增加位點做的，多數試劑盒處理的基本都是2周左右開始降解，2周時間一花就沒了，再增加一個基因，又得重新處理，再收一次費，不光多花了時間，還多花錢。
4、本實驗室僅對樣本測序結果負責，舉個簡單的例子：大家平時測突變的時候，這個樣本沒有突變，峰圖都給你了，測序質量也沒問題，但你非要突變，那這個我們是不負責的，我們保證實驗數據的真實性。
每次遇到學校寒暑假財務關門的時候，都沒有收大家的錢，提前開工了，但是現在快5月了，一部分錢還沒收回來，希望大家體諒一下我，催實驗結果的時候，我們春節都沒放假給大家加班，一直拖著，大家於心何忍？我們買qiagen的試劑，是必須付全款才能拿到貨的，琳琳姐心都碎了，每次催帳都要糾結幾天才敢發個信息問一下，生怕得罪了你們，我就感覺是自己欠錢了一樣。
回款晚點，我都能理解，畢竟很多醫院報銷慢，但至少得讓我心裡有個數，告訴我大概回款時間對不？
我知道你們不是故意拖欠，只是有拖延症，畢竟這個事沒有影響到你們生活，可我要靠這個生活的哇，拜託大家了！