焦磷酸測序(Pyrosequencing)

2021-02-23 卓灝醫藥
焦磷酸測序技術(Pyrosequencing)是一種新型的酶聯級聯測序技術，適於對已知的短序列進行測序分析，其可重複性和精確性能與SangerDNA測序法相媲美，但速度大大提高。焦磷酸測序可同時對大量樣本進行分析，為高通量、低成本、快速、準確檢測DNA甲基化、SNP等單個或連續多個核苷酸變異提供了理想的技術平臺。因其能夠快速的檢測甲基化的頻率，對樣品中的甲基化位點進行定性和定量的分析，被稱為甲基化檢測的金標準。

技術優點

1. 唯一得到定量序列結果的技術

技術比較


焦磷酸測序技術是由4種酶催化的同一反應體系中的酶級聯化學發光反應，其原理為：引物與模板DNA退火後，在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase).螢光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷雙磷酸酶(Apyrase)4種酶的協同作用下，將引物上每一個dNTP的聚合與一次螢光信號的釋放偶聯起來，通過檢測螢光的釋放和強度，達到實時測定DNA序列的目的。

實驗流程

測序原理

技術應用


結果展示

1、甲基化檢測

灰色區域：甲基化率；黃色區域：重硫酸鹽處理程度

2、SNP檢測




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