化學學院何川/賈桂芳課題組在Angew. Chem. Int. Ed.發文報導RNA...

2021-01-07 北京大學新聞網

2018年10月,北京大學化學與分子工程學院何川/賈桂芳副研究員課題組在Angew. Chem. Int. Ed.(《德國應用化學》)雜誌在線發表題為「An Elongation and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N6-methyladenosine Modifications」的研究論文(DOI:10.1002/anie.201807942),報導了一種快捷檢測RNA中N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的新方法。

表觀轉錄組學(epitranscriptomics,又稱「RNA表觀遺傳學」)是近年來興起的前沿科研領域。RNA化學修飾m6A作為表觀轉錄組學中的明星修飾,是真核mRNA和非編碼RNA中的主要化學修飾。m6A可以被修飾酶和去修飾酶進行動態可逆調節,並被結合蛋白識別調控RNA加工代謝,參與許多重要生物學調節,如周期節律、幹細胞分化、癌症發生發展及RNA病毒等。m6A檢測對於其分子生物學功能和相關疾病研究非常重要。目前報導的檢測方法中只有SCARLET能夠實現單mRNA和lncRNA中m6A單鹼基解析度的檢測,但該方法操作複雜耗時,需要較大劑量的放射性同位素標記,難以廣泛應用。

何川/賈桂芳課題組開發了SELECT方法(其原理如下圖所示),該方法簡單快捷,只需三小時就能夠實現低豐度轉錄本中m6A單鹼基解析度的檢測。該方法基於m6A修飾的兩點特性:(i)能夠阻礙DNA聚合酶在反轉錄過程的單鹼基延伸;(ii)能夠降低缺口連接酶的連接效率。SELECT方法採用螢光定量PCR的方法進行定量,結合方法優化,其又發展了三個應用實例:(i)在生物學樣本總RNA或總mRNA中檢測mRNA或lncRNA上單位點是否含有m6A修飾;(ii)檢測生物學樣本中特定m6A位點的修飾比例;(iii)鑑定m6A甲基轉移酶或去甲基酶的生理作用靶點。SELECT方法不僅簡化了生物學樣品中m6A修飾的檢測過程,實現低豐度RNA中m6A單鹼基解析度的檢測,還能夠應用於其它RNA化學修飾的檢測中,例如N1-甲基腺嘌呤(N1-methyladenosine,m1A)和2』-O-甲基化修飾(2』-O-methylation,Nm)等。

SELECT方法原理示意圖

北京大學化學與分子工程學院2014級博士研究生肖雨為第一作者,賈桂芳為通訊作者,相關工作得到國家科技部和國家自然科學基金委等經費資助。

編輯:麥洛

責編:凌薇


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