文章來源：原創同珂 等中國動物檢疫
摘要：為探究華中地區臨床發病豬群豬圓環病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV-2）感染狀況及特點，2018—2019年，從湖北省的武漢、隨州、鹹寧、荊州，湖南省的常德、衡陽、汨羅、株洲等8個地市的40個規模化豬場，採集臨床發病豬群血樣1 550份，利用本實驗室建立的巢式PCR診斷技術進行PCV-2病原學檢測，並採用SPSS 24.0卡方檢驗，對結果進行不同地區、不同養殖階段、不同季節統計分析，同時追蹤與其他繁殖障礙性疾病病原的混合感染情況。
結果顯示：湖南、湖北兩省8個地區發病豬群的PCV-2平均檢出率為31.68%（491/1550），所有檢測地區均有不同程度的PCV-2感染，病原檢出率在8.79%~49.01%之間波動，差異顯著（P＜0.05）；不同養殖階段發病豬群均有PCV-2陽性檢出，檢出率在12.17%~60.84%之間波動，差異顯著（P＜0.05），其中育肥豬和保育豬檢出率較高，而哺乳仔豬、經產母豬和後備豬偏低；PCV-2一年四季均有檢出，檢出率在5.98%~49.81%之間，但有一定的季節性，夏冬季節檢出率偏高，而春秋季節偏低（5.98%），差異顯著（P＜0.05）；PCV-2和其他繁殖障礙性疾病病原的多重感染較為常見，其中以PCV-2+PRRSV雙重感染和PCV-2+PRRSV+PRV三重感染為主，而四重以上感染較為少見。結果表明，湖南、湖北兩省的PCV-2病原分布較為廣泛，是導致該區域豬群發病的重要病因，但其流行有一定的地區、豬群和季節差異。
建議加強高流行地區、高發季節、重點豬群的免疫、檢測和生物安全管理，逐步控制和淨化PCV-2。本研究初步了解了華中地區PCV-2的流行特點，為其流行控制和淨化制定提供了參考。
豬圓環病毒（porcine circovirus，PCV）屬於圓環病毒科，是迄今為止脊椎動物中最小的DNA病毒之一。PCV有多個血清型，如PCV-1、PCV-2及PCV-3等。PCV-1是豬腎細胞系的汙染物，對豬無致病性，但能產生血清抗體。相比之下，PCV-2具有致病性，以侵害動物體內的免疫系統為主，是公認的世界上危害最嚴重的豬病病原之一，是斷奶仔豬多系統衰竭症候群（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）和皮炎與腎病症候群（PNDS）的主要病因。PCV-2可感染各階段豬群：5~16周齡階段，易導致PMWS；育肥後期（16~22周齡），則更多表現呼吸疾病症候群。最近發現的PCV 3與豬皮炎與腎病症候群以及生殖衰竭、心臟和多系統炎症有關，但其致病機制尚不清楚。
為了解華中地區臨床發病豬群PCV-2感染狀況及特點，2018—2019年，從湖南省、湖北省部分地區規模化豬場，採集1550份臨床發病豬樣本，利用本實驗室建立的巢式PCR方法進行PCV2病原學檢測，並分析不同地區、不同養殖階段、不同季節及與其他疾病混合感染情況，以期為今後PCV-2淨化提供依據和數據支撐。
材料與方法
樣品來源
2018年3月—2019年2月，從湖北省的武漢、隨州、鹹寧、荊州，湖南省的常德、衡陽、汨羅、株洲等8個地市的40個規模化豬場（存欄量＞500頭），採集出現PMWS、PDNS、繁殖障礙、傳染性先天性震顫（CT）、腹瀉等臨床症狀的發病豬群，每月1次採樣（前腔靜脈採血），共計採集1550份血清樣品，-20℃保存待檢（表1）。被檢豬場均按各自製定的PCV-2免疫程序進行免疫。
樣品處理及病毒核酸提取
將採集的全血1500r/min 離心30min，取上清；按照Axygen體液提取試劑盒說明書，對上清進行病毒核酸提取；用Nanodrop 1000檢測所提取DNA的濃度和純度，然後將DNA於-20℃保存備用。
病原學檢測
採用本實驗室建立的巢式PCR檢測方法，對樣品進行病原學檢測。引物序列如表2所示。
數據統計與分析
對不同地區、不同養殖階段、不同季節及混合感染的檢測結果，採用SPSS 24.0卡方檢驗進行差異性分析，P＞0.05為差異不顯著，P＜0.05為差異顯著。
結果與分析
不同地區
不同地區檢測結果（圖1）顯示：湖南、湖北兩省8個地市的PCV-2檢出率在8.79%~49.01%之間波動，平均檢出率為31.68%（491/1550），其中常德市最高（49.01%），其次是武漢、鹹寧、衡陽、株洲、荊州、汨羅，隨州市最低（8.79%）。該結果表明，這2個省區的規模化豬場均存在不同程度的感染，且不同地市間PCV-2檢出率差異顯著（P＜0.05）。
不同養殖階段
不同養殖階段檢測結果（圖2）顯示：各養殖階段豬群均有PCV-2陽性檢出，檢出率在12.17%~60.84%之間，其中育肥豬（60.84%）和保育豬（58.29%）檢出率較高，而哺乳仔豬（16.87%）、經產母豬（14.04%）和後備豬（12.17%）偏低。不同養殖階段豬群的PCV2檢出率差異顯著（P＜0.05）。
不同季節
不同季節檢測結果（圖3）顯示：PCV-2一年四季均有流行，但具有一定的季節性，其中夏季（6—8月）檢出率最高（49.81%），而春季（3—5月）最低（5.98%）。不同季節PCV-2檢出率差異顯著（P＜0.05）。
混合感染
將送檢的1550份臨床樣品同時進行PCV-2、PCV-3、豬繁殖與呼吸症候群病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬細小病毒（PPV）病原學檢測。結果（表3）顯示：除PCV-3未檢出外，其他4種病原均存在不同程度的單一感染，其中PRRSV單一感染率（32.39%）最高，其次是PRV（19.81%），PPV較低（13.55%），而PCV-2單一感染最低（2.45%）；雙重感染（49.74%，771/1550）最為常見，以PCV-2+PRRSV為主，其次是PCV-2+PRV，PCV-2+PPV最低；三重感染率（16.58%）較低，以PCV-2+PRRSV+PRV為主，其次是PCV-2+PRRSV+PPV，PCV-2+PRV+PPV最低。四重感染（0.06%，1/1550）極少。單一感染、雙重感染、三重感染的檢出率差異顯著（P＜0.05）。
討論
隨著規模豬場數量的逐漸增多，生豬交易愈加頻繁，PCV-2感染率也逐年提高，給我國養豬業造成極大危害。本研究對2018—2019年華中地區湖南、湖北兩省8個地市規模場送檢的發病豬血清樣品進行PCV-2病原學檢測，發現PCV-2檢出率在8.79%~49.01%之間，表明PCV-2在兩省規模化豬場普遍流行，平均檢出率為31.68%，表明流行較為嚴重。韋顯凱等2016年對廣西部分地區豬群5種疫病流行情況監測發現，PCV-2檢出率為39.12%；蔣新華等對2013—2017年採集自江西省10個地區的1082份疑似PCV-2感染豬病料組織進行病原學檢測發現，610份為PCV-2陽性，總檢出率為56.4%。上述結果均表明，PCV-2在我國流行廣泛且較為嚴重，對我國養豬業形成較大危害。不同地區間的差異，通常與豬場的飼養密度、環境控制及管理水平有關，也可能受地理環境及自然氣候等因素影響。湖南省養豬業較密集，豬只調運較頻繁，PCV-2通過拉豬車、汙染的工具、糞便等傳播的風險較高，因此應嚴格執行生物安全措施，實行封閉性管理，發現可疑病豬應及時隔離，並加強外進貨物、車輛、返廠人員的消毒，防止病原傳入。感染率低的地區應對發病豬進行有效隔離，斷絕與其他健康豬只的接觸，儘可能控制PCV-2的橫向傳播，同時嚴格把控引種豬只來源，堅持自繁自養。
不同養殖階段豬群檢測結果顯示，PCV-2可感染各養殖階段豬群。育肥豬（60.84%）和保育豬（58.29%）感染較為嚴重，而哺乳仔豬（16.87%）、經產母豬（14.04%）、後備豬（12.17%）較輕，這與劉冰許等對2015年新鄉市PCV-2病原學檢測的結果相近。哺乳仔豬通過攝取初乳獲得母源抗體保護，從而免受PCV-2侵害。也有研究表明，仔豬在母源抗體降至臨界值時，如果疫苗免疫不及時，往往在仔豬斷奶後轉至保育時出現PMWS症狀，這也解釋了保育豬群感染的主要原因。而育肥豬的飼養密度較大，豬舍環境、管理水平都有所欠缺，豬群通過口-鼻-糞或者汙染工具在豬群中水平傳播，因而感染概率較高。因此，仔豬應在3~6周齡接種PCV-2疫苗；育肥、保育豬養殖密度較大，可適當增設通風口、排氣扇，對轉棟、轉欄的豬舍（環境棉拭子）、豬只（鼻/肛拭子）的PCV-2病原學抽樣檢測，做到環境、豬只雙陰性方可轉群；對母豬應採取PCV-2疫苗普免（3~4次/年）。
檢測發現，該地區PCV-2感染具有一定季節性，其中夏季和冬季是感染高峰期，與段群棚等調查的結果基本一致。分析原因，華中地區夏熱冬寒，溼度高，冷熱應激可引起豬群不適，導致機體抵抗力下降，而PCV-2可侵害豬免疫系統，抑制體內免疫應答，影響PCV-2疫苗的效力，從而導致感染率升高。因此，夏、冬季應嚴格控制豬舍溫度，避免因冷熱應激致使豬群的免疫力降低，且PCV-2免疫程序也需參考當地氣溫變化進行調整。同時，也需加強夏、冬季的綜合防疫工作。
本檢測結果顯示，PRRSV單一感染率較高，與PCV-2的雙重感染和三重感染較為多見，與段群鵬的觀點一致。這是因為PCV-2主要侵害豬的免疫系統，導致機體免疫力下降，從而引起多種病原協同感染。因此，規模化豬場應加強豬群的PCV-2病原學監測，完善生物安全體系，在做好PCV-2流行控制的同時，加強對其他疾病的防控和治理。
結論
綜上所述，湖南、湖北兩省PCV-2分布較為廣泛，一年四季皆有流行，可感染所有養殖階段豬群，與其他病原的混合感染嚴重，但其流行有一定的地市、豬群和季節差異，其中保育豬群感染最嚴重，夏、冬季節高發。建議加強高流行地區、重點豬群、高發季節的免疫、檢測以及生物安全管理，逐步控制和淨化PCV-2。