電泳概述 - 專區 - 生物谷

2020-11-26 生物谷
電泳是在溶劑中通過電場轉移帶電分子,任何帶電的離子或者基團放置在電場中都將會遷移。除非在它們的等電點,大多數生物聚合物在任何pH值時都帶有淨電荷,它們將會以與電荷密度成比例的方式移動。分子在電場中的遷移取決於電場的強度、淨電荷、分子的大小和形狀、離子強度、粘度和分子移動介質的溫度。作為一種分析工具,電泳簡單、快速,並且具有高靈敏度。用來研究單一、帶電荷的分子的特性,也用來作為一種分離技術。
支持基質
最常用的支持介質是聚丙烯醯胺和瓊脂糖凝膠。它們作為多孔介質起作用,類似於一個篩子,延遲和阻礙大分子的運動,而允許小分子的自由地移動。過濾分子的範圍最終取決於膠孔大小和遷移分子大小的接近程度。瓊脂糖有一個相對較大的孔徑,用來分離大分子例如核酸、大蛋白和蛋白複合物,聚丙烯醯胺形成孔徑較小的膠,適合於分離大多數蛋白和小片段核酸。
聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)
 聚丙烯醯胺膠通過丙烯醯胺單體聚合成長鏈,同時通過雙功能化合物例如甲叉雙丙烯醯胺對這些長鏈進行交聯,丙烯醯胺的濃度對任何凝膠有效孔徑的大小都有顯著的影響――濃度越高,孔徑越小,反之亦然。因而,選擇合適的丙烯醯胺濃度是最佳分離蛋白組分的關鍵。

等電聚焦和2D電泳
蛋白的等電點(pI)是蛋白淨電荷為零時的pH值。如果將蛋白置於pH值高於它的pI的溶液中時,其總的淨電荷為負電荷,在電場中向陽極(+)移動。低於pI時,蛋白帶正電荷,向陰極(-)移動。等電聚焦(IEF)是一種電泳技術,根據蛋白的等電點,按照連續的pH梯度分離蛋白。所有的蛋白均為兩性化合物,它們的淨電荷取決於局部的pH值。IEF後,樣品能夠在PAGE膠上根據分子量的大小進一步分離。2-D電泳可以完成樣品高解析度分離,以進行隨後的分析。ZOOM® Strip pH 4-7% and NuPAGE® Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM® Gel

瓊脂糖膠電泳
0.8% E-Gel®凝膠電泳是用來分析和鑑定DNA片段的標準方法。不象蛋白,絕大多數的蛋白大小在3-200KD之間,目的核酸片段的大小可能在3-10,000KD之間變化,因而沒有單一的電泳介質或者基質能夠為正在研究的全部大小範圍的DNA分子提供最佳的解析度。另外,聚丙烯醯胺可以長度大約達到3,000bp的單鏈和雙鏈核酸分子提供優良的解析度和上樣能力。

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