細胞培養之真菌,細菌的防治

2021-01-11 上海啟達生物

冬天已經過去了大半了 ,春天就要來了,實驗室在一樓,地下室或者其他容易潮溼的地方的小盆友又要開始新一輪的防細胞汙染大戰了。

請遵守細胞汙染永恆定律:無論什麼細胞只要是不重要的細胞汙染了,立刻加84棄之,重新復甦新凍存管培養;實在需要挽救的請參考以下:

細菌汙染:主要有洋蔥霍爾伯德菌型汙染

確定是非常珍貴的細胞 建議分別配置含10倍慶大黴素和兩性黴素溶液(G/A)的PBS和5倍慶大黴素和兩性黴素溶液(G/A)的完全培養基各一份。然後先用10倍雙抗的PBS洗滌細胞5-10次, 然後用5倍雙抗的完全培養洗滌細胞3次以上,再加上含雙倍的G/A溶液放培養箱培養,一個小時後換液,持續4個小時後,再加上正常培養細胞所需的抗生素,過夜,到最終確定細胞沒有任何汙染物,因此時細胞受損過大,建議優化培養基方式(血清提高2%-5%)或者立即凍存細胞,一個月後復甦。

真菌汙染:

汙染的多是麴黴菌,白色念珠菌,酵母菌,黑黴菌,孢子菌,真菌主要以預防為主,防治為輔,已經汙染了,建議採用以下方法:

1. 細胞一旦汙染,很難挽救,即使使用制黴菌素或放線菌素D,也是傷敵八千自損一萬的辦法,可使用抗生素進行查殺,但是高濃度的抗黴菌素對細胞有毒性作用。

2. 把所有細胞從汙染的CO2孵箱轉移,採用過氧乙酸擦洗孵箱(全部,尤其四個角)。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽瀰漫。待過氧乙酸的氣味消散後,再移入細胞;

3. 用0.5%新潔爾滅擦拭超淨臺和牆壁,確保不留死角,地面用新潔爾滅消毒液拖地。

4. 將環境徹底消毒,整個培養間高錳酸鉀或者乳酸燻蒸,孵箱內部包括託盤等全部用苯酚搽洗,封閉2天。

真菌汙染預防方法:

1),將細胞移出來,用微量硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤裡加適量硫酸銅或者酸氫二鈉高鹽液體防止黴菌

2)孵箱應定期清潔,大約一個月左右清潔一次,

3)可在培養基裡加兩性黴素或制黴菌素)或[放線菌素D或雙抗進行預防。

4)最主要的還是要培養良好的無菌觀念,實驗室儘量不要大聲說話,佩戴好口罩,手套,操作時應小心,避免培養基撒入培養箱以及生物安全櫃,這些撒入培養箱的培養基為細菌及真菌的繁殖提供了很好的條件。

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    :常見的汙染如下:1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用於細胞培養,無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體汙染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。4、黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲遊來遊去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。
  • 同樣是菌,細菌和真菌到底哪裡不一樣?
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