在進行DNA基因組分離之前,為什麼推薦使用豐富的YPD 培養基?探討這個話題之前,首先我們來了解一下DNA基因組的分離方法主要有哪些。
一般情況下,在知道基因的部分核苷酸序列或者全部的核苷酸序列的情況下,基因組的分離製備方法主要分為兩大類:一類是對基因化學合成法,另外一種是基因生物製備法。通常會將基因生物製備法分為文庫法、cDNA 文庫法和PCR法等。
化學合成法
對於基因來說,它的化學本質其實是一段具有特定生物特徵和功能的核苷酸序列。若已知其基因的分子結構,那麼就可以通過化學合成的方法來實現基因的分離和製備。關於基因的化學合成法主要有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亞磷酸三酯法、亞磷酸醯胺法及固相亞磷酸醯胺法。
基因文庫法
基因文庫法是指將目的基因直接從基因組中分離出來的方法。基因組文庫也就是指匯集某一基因組所有DNA 序列的重組DNA 群體。當具備了基因文庫之後,就可以選取合適的目的基因片段作為探針,通過富養的菌落雜交技術,從而在大量的菌落中篩選出含有目的基因的重組體菌落,在對其進行擴增和提取,就可以獲得目的基因片段。
利用YPD培養基進行基因組的分離其實就是一種基因文庫法。
因為YAC載體可以用來構建大片段的基因文庫,特別是用來構建一些高等真核生物的基因組文庫。當用BamHⅠ切割成線狀後,就形成了一個微型酵母染色體,包含染色體複製的必要順式元件,如自主複製序列、著絲粒和位於兩端的端粒。這些元件在酵母菌中可以驅動染色體的複製和分配,從而決定這個微型染色體可以攜帶酵母染色體大小的 DNA 片段。裝載了外源 DNA 片段的重組子導致抑制基因 sup4 插入失活,從而形成紅色菌落;而載體自身連接後轉入到酵母細胞後形成白色菌落。這些紅色的裝載了不同外源 DNA 片段的重組酵母菌菌落的群體就構成了YAC文庫。
分離基因組DNA之前推薦使用豐富的YPD培養基,可以用來增殖攜帶YAC的酵母菌株。因為YPD培養基含有尿嘧啶和色氨酸,對保持YAC無選擇性。
我們會發現市面上會有非常多種類的培養基,那麼有些人就會疑惑了,為什麼培養基不能通用。這是因為對於不同的微生物來說,它們的生長環境各不相同,所需的養分也不相同,那麼不同的溫度、溼度和PH值都可能對微生物的生長造成影響,因此不同的培養基對於不同的菌種來講有著抑制或者促進的作用,為了能夠精確的對實驗結果進行觀察和判斷,那麼就要針對不同的微生物使用不同的培養基。
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