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(圖源:163.com)
2020年春節,大家過得與眾不同。新型冠狀病毒作為冠狀病毒家族的「老七」,給人們的生活和身體健康帶來了切實的影響。大家每天醒來第一件事就是確認最新的確診人數,在社交媒體上可以看到,現在確診人數仍然處於指數增長期。
那如此多的確診人數是怎麼得出的?這就不得不說這幾天的新聞裡一個常見詞——「試劑盒」。 新型冠狀病毒2019-nCoV是RNA病毒,中國科學家已向全世界公布了新型冠狀病毒的基因組序列,檢測方法一般是核酸檢測,最常用的方法是實時定量螢光PCR(Real-time PCR),這種方法可以在體外放大擴增病原體的核酸(RNA),並通過螢光探針來實檢測擴增產物。
在疫情發生初期,確診人數較少,有一部分限制因素是檢測時間長,每天的檢測數量有限,這都會影響確診進度。國內很多試劑公司都在加班趕製試劑盒,希望能夠支援武漢,加快確診速度,緩解緊張情緒。試劑盒究竟是什麼呢?
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螢光定量PCR核酸檢測試劑盒
生物體的遺傳物質分為兩種,DNA和RNA。DNA具有雙螺旋鏈狀結構,更加穩定,而RNA是單鏈結構,冠狀病毒就是RNA病毒,更加容易變異適應人體。確診病人是否感染了新型冠狀病毒,最主要的方法是檢測病人或者疑似病例身上(痰液、血液、肺泡灌洗液)是否存在病毒的遺傳物質。
但是在病人樣本中能夠提取出來的RNA含量有限,且RNA單鏈十分容易斷裂和降解。所以就需要有一種方法可以快速檢測病毒樣品中的核酸含量。
螢光定量PCR是1996 年由一家美國公司推出的一種新定量試驗技術,它通過螢光染料或螢光標記的特異性探針,標記跟蹤PCR產物進行實時監測反應,利用與之相適應的軟體對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
PCR是什麼呢?PCR是聚合酶鏈式反應,它可以將微量的DNA大幅增加。螢光定量PCR的過程是利用酶以逆轉錄反應從RNA生成DNA,然後以DNA為模板進行擴增,此時獲得可檢測的片段就會多很多。
新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒(圖源:今日頭條)
在武漢肺炎疫情最初出現的時候,疾控中心對獲得的病人樣本進行檢測時,涉及到提取病毒RNA樣本、進行PCR反應等,花費時間較多。現在各個公司推出的試劑盒,能夠有效簡化時間,最快2小時就獲得結果,大大增加了每天的檢測效率。不同公司試劑盒的出現,顯示我國生命科學領域的實力,也展現了疫情面前萬眾一心的真情。
為避免汙染,檢測至少要在達到生物安全二級的實驗室裡做,檢測實驗室裡要有負壓設備,氣流只能進不能出;實驗室的潔淨度、通風系統、消毒滅菌都有很高的要求。如果不具備條件去做檢驗,很可能會出現病毒洩漏的情況,實驗室成了汙染源。
什麼時候能夠判定病人已經痊癒了?一般情況下,直到患者所採集的樣品,出現兩個連續的至少間隔 24 小時的陰性結果,就可以看作臨床康復了。有了試劑盒,檢測人員的需求就可以更快得到滿足。
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免疫反應實現快速檢測
很多人都有這樣的經歷,在發熱門診進行甲流、乙流檢測時,護士利用棉棒在口腔或者鼻腔取得樣品後,半小時內就會有結果。而愛滋病的快速檢測試劑盒,在10分鐘內可以得出結果。流感病毒和愛滋病病毒都是RNA病毒,為何它們的檢測試劑盒能夠做到如此迅速?
HIV膠體金快速檢測試劑盒(圖源:百度)
對於這幾種病毒已經有一定的研究基礎,能夠利用試劑盒快速獲得結果,是利用了免疫反應。市面上常見的ELISA酶聯免疫試劑盒和膠體金檢測試劑盒,都是利用了「抗原-抗體」這種原理。
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,同時還要保留免疫活性和酶活性,通過利用標記物的顏色反應進行快速檢測。辣根過氧化物酶(HRP)是迄今為止在ELISA中應用最為廣泛的標記用酶,主要是因為其一方面易於提取,價格相對低廉;另一方面性質穩定,耐熱及有機溶劑的作用,與抗原或抗體偶聯後,活性很少受損失。
ELISA反應原理(圖中E常用的是HRP)(圖源:百度)
膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸等作用下,聚合成為特定大小的金顆粒,並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態,稱為膠體金。膠體金在弱鹼環境下帶負電荷,可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合,而且不影響蛋白質的生物特性。膠體金本身為紅色,不需要加入顯色試劑,省卻了酶標的致癌性底物及終止液的步驟,對人體無毒害。由於這種對於特定病毒的抗原和抗體的結合反應,實現了試劑盒的快速檢測,給疾病的篩選創造了極便利的條件。
目前獲批新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒的公司只有4家,不過與以往相比,國家對待此次疫情的審批速度已經很快了。現在對於新型冠狀病毒的研究還處於初期階段,基於免疫反應的快速檢測試劑盒還在研發中。試劑盒雖然能夠大大縮短時間,但是前提是要保證陽性結果的準確率,一般來講,核酸檢測試劑盒的準確率要更高一些。
最近,有報導稱一些醫生和專家建議「以CT肺片檢測陽性代替核酸檢測陽性作為臨床確診的主要依據」。他們認為核酸檢測條件要求高,且存在一定的假陰性,而且肺部CT可以進入社區檢測,能夠更快的排查疑似病例。
不管是核酸檢測還是肺部CT,都有各自的優缺點。肺部CT能夠在影像學上看到結果,需要病毒在肺部引起反應,還會受到其他因素(普通感冒、肺部疾病)的影響。當務之急是能夠快速獲得確診病例進行隔離。對普通人來講,自我預防仍是最簡單最有效的方法。
科技的進步與人們的生活密不可分,真正的科研實力總在遇到挫折時顯現。因此,我們要居安思危,有信心打贏這場沒有硝煙的戰「疫」。
參考文獻:
https://www.huxiu.com/article/337481.html
https://mp.weixin.qq.com/s/XIbJImyqWCU9O5p7c_eEzQ
https://www.chemicalbook.com/NewsInfo_818.htm
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