使放射自顯影的圖像條帶銳度更好,同時使靈敏度略微提高

2021-01-10 菲克西餐廳

附加方案鹼性瓊脂糖凝膠的放射自顯影多數情況下,利用鹼性瓊脂糖凝膠電泳分析的DNA是用3Pp標記的,可以用放射自顯影檢測。因凝膠乾燥後(見下文)可減少信號猝滅,因而使放射自顯影的圖像條帶銳度更好,同時使靈敏度略微提高。

但是,如果DNA中有足夠強的放射性標記,條帶的銳度將不是主要問題,或者在DNA條帶需從凝膠中回收的情況下,凝膠可以不經乾燥而直接進行放射自顯影。

方法1:溼膠的放射自顯影

1.電泳完畢,將凝膠放置於玻璃板上。

2.用KimWipes擦拭紙吸乾凝膠表面及周圍的玻璃板上的殘留液體。

3.用發光標記物標記玻璃板。

4.在感光影像儀上捕獲放射性影像(參見方案7)。

方法2:幹膠的放射自顯影

1.將凝膠浸於7%TCA溶液並於室溫處理30min,不時地搖動溶液以確保凝膠全部被溶液覆蓋。

2.將凝膠置玻璃板上,其上覆蓋幾層紙巾,並用另- -玻璃板覆蓋,乾燥數小時:或凝膠置於兩張Whatman 3MM濾紙上,用市售凝膠乾燥機進行真空乾燥。切勿加熱,以免凝膠融化。

3.將乾燥的凝膠置於3MM濾紙上,粘貼螢光標記物標籤以確保凝膠圖像位置的準確性。

4.在感光影像儀上捕獲放射性影像(參見方案7)。分子克隆實驗中的很多常用技術手段都依賴於在二維(2D)平面上對放射性原子的準確分布定位方法的建立。如果沒有這些方法,Southerm 雜交、Northerm 雜交、放射性DNA序列分析以及文庫篩選等工作都無法開展。

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