如何挑選細胞基因敲除的細胞株?海星生物細胞庫

2020-12-06 cas9x細胞基因編輯

Cas9X實驗室在幾年的合作歷程中,我們每年都接到大量的客戶的細胞,用於做細胞基因敲除或者其他的細胞基因編輯工作。我們與一流的實驗室合作過,也和各大醫學系統的實驗室合作過,我們每每感覺到細胞生物學研究的困難,就是細胞來源的穩定性對細胞基因敲除結果的影響太大了。而細胞基因敲除或者其他的細胞基因編輯又受到細胞本身的影響巨大,很多困難的課題換一個細胞就解決問題了,為了解決這個巨大的困難,我們被迫開始花重金籌建了自己的細胞庫,我們一開始只想籌建一個能夠涵蓋常見的100種細胞就足夠了,不過隨著時間的推移,我們的細胞庫也遠遠超過了這個量,而且我們又在普通細胞庫的基礎上為了滿足單克隆的要求籌建了子克隆庫,Cas9-100細胞庫!這個細胞庫的細胞都是特別篩選過的,第一更合適做單克隆,第二電轉的參數和轉染條件我們全部都掌握了。

氣相液氮罐

細胞的基因敲除對細胞的要求包括:

1、細胞基因敲除的細胞必須沒有任何汙染,支原體和物生物的感染都會影響細胞的增殖速度和克隆形成率;

2、細胞基因敲除細胞株必須沒有任何細胞汙染,我們在建設細胞庫的過程中,我們發現很多細胞都是混雜的細胞,做過了STR檢測我們才更有把握;

3、細胞基因敲除的細胞株必須有更好的克隆形成率,我們之前做的很多細胞克隆形成極差,單克隆形成速度極慢,所以如何更好的把握實驗,我們的細胞經過篩選可以和我們獨有的ClonePlus要匹配和能夠穩定的生成單克隆的細胞,我們才會放入我們的子庫中。

4、逐步累積成功的參數,我們和客戶分享數據,並為客戶提供基因敲除細胞株的細胞擴增的服務。

5、我的細胞培養系統也可以和客戶分享,讓客戶能夠更好的擴增基因敲除細胞株。

細胞形態與轉染率

ClonePlus技術:是Cas9X技術平臺研發的專有高效細胞敲除技術,主要通過高通量電轉系統和高通量的克隆分選技術結合,獲得基因編輯的單細胞,其克隆形成率可以達98%,就算是克隆形成率低的細胞株也能獲得敲除單克隆。

相關焦點

  • THP-1基因編輯細胞株——如何快速構建THP-1基因敲除細胞株
    在血液粒細胞的研究中,THP-1是一個非常經典的細胞模型。如何在THP-1細胞株進行基因敲除/基因敲入/基因突變也是各個課題組的一個最為關心的問題!如何解決THP-1細胞的基因敲除,也是我們海星生物的一個重要的研發方向,經過了一年多的研發,我們終於在根本上解決了這個THP-1細胞株的基因編輯的困難,可以為客戶提供編輯效率高、結果穩定、周期快速的細胞基因敲除的解決方案。
  • 超快基因敲除細胞系構建流程,乾貨
    科學家在做細胞基因敲除之前會基因敲低,但由於shRNA技術本身的限制,無法得到基因功能完全缺失的細胞(一般shRNA約為70%敲除),甚至經常發生shRNA敲低了,但細胞WB效果不好;同時Knockout也會出現使用碼移敲除導致敲除不乾淨的問題!
  • 超快基因敲除細胞系構建流程
    Cas9X.com | 海星生物科學家在做細胞基因敲除之前都會先做基因敲低,但是由於shRNA的技術本身的限制無法獲得基因功能完全缺失的細胞(一般shRNA大概是70% Knockdown),甚至經常會出現shRNA敲低了,但是細胞WB效果不好;同時Knockout使用移碼敲除的方式也會出現
  • 細胞技術討論——RAW264.7的基因敲除心得
    對於如何解決RAW264.7細胞的基因敲除,也是海星生物-cas9x.com的一個重要的研發方向,歷時一年多的研發,我們終於在技術層面解決了這個RAW264.7細胞株的基因編輯的難題,可以為客戶提供編輯效率高、結果穩定、周期快速的細胞基因敲除的解決方案。
  • 有了這份攻略,HepG2人肝癌細胞基因敲除效率提成了好幾倍!
    HepG2人肝癌細胞在藥物作用下的相關研究中代謝酶始終保持穩定,所含有的生物轉化代謝酶與人正常肝實質細胞同源,是體外肝細胞代謝或遺傳毒性試驗方面的理想的細胞系。如何在HepG2細胞株上進行基因敲除/基因敲入/基因突變也是各個課題組特別關心的問題!
  • 有了這份攻略,HepG2人肝癌細胞基因敲除效率提成了好幾倍
    HepG2人肝癌細胞在藥物作用下的相關研究中代謝酶始終保持穩定,所含有的生物轉化代謝酶與人正常肝實質細胞同源,是體外肝細胞代謝或遺傳毒性試驗方面的理想的細胞系。如何在HepG2細胞株上進行基因敲除/基因敲入/基因突變也是各個課題組特別關心的問題!
  • 分享Hela 敲除細胞的運用-源井生物
    採用細胞稀釋法和嘌呤黴素篩選法分別確定雙sgRNA和單sgRNA引導基因編輯的成功率。Western blot分析表明,雙sgRNA定向p62基因敲除效率高於單sgRNA定向p62基因敲除效率。靶序列測序分析提示p62編碼基因存在較大的缺失突變。H2O2處理後Hela細胞穩定敲除結果表明,p62基因敲除能顯著抑制H2O2誘導Hela細胞早期凋亡。因此,成功建立了p62基因敲除Hela細胞系。
  • circRNA敲除細胞株揭秘其對基因調控的重要作用
    相信隨著生物技術的發展以及越來越多對circRNA的深入研究,circRNA的形成和作用機理可以更加清晰,在疾病預防,診斷及治療方面也可以起到重要的作用。circRNA 的基因編輯與調控,為疾病研究與治療助力!circRNA涉及許多複雜的功能,那一般是如何對它的功能進行研究的呢?
  • 關於基因敲除U251細胞系的應用-源井生物
    而且,U251細胞系可用於從U-251人膠質母細胞瘤細胞系中提取癌幹細胞,這使其在基因編輯領域成為受歡迎的細胞系。此外,它經常用於研究膠質母細胞瘤模型中JARID1B(富含Jumanji AT的交互式區域1B)在神經膠質瘤的發病機理中的作用以及艾力諾弗C聯合替莫唑胺的治療效果。因此U251細胞是用於基因敲除,穩轉細胞株等的合適細胞。
  • 這是基因敲除KYSE-150細胞系的成功秘籍-源井生物
    據報導,細胞攜帶的致癌基因c-erb-B(8倍)和細胞周期蛋白D1(4倍),並且細胞可以在裸鼠中形成腫瘤,因此KYSE-150細胞系經常用於涉及基因編輯的癌症研究中,例如CRISPR基因敲除/敲入和點突變。應用範圍: 1.
  • 如何在細胞系中敲除原癌基因或抑癌基因?
    我們一般在細胞基因敲除的時候都是在腫瘤細胞系中進行的,我們一般將要敲除的基因分為兩類:促進細胞增殖基因(原癌基因),抑制細胞增殖基因(抑癌基因),所有的後面細胞的操作都要和這兩個概念有關。促進細胞增殖基因:該基因在細胞代謝、分裂、細胞周期等具有促進的作用,可以使得細胞的增殖速度加快,對細胞生長有優勢;抑制細胞增殖基因:該基因是抑制細胞代謝、分裂或者對細胞的分裂有嚴格的調控作用,可以使得細胞的增殖處於正常速度或者是不失控的狀態下,對細胞的生長處於正常狀態非常重要。
  • 基因敲除EGFR細胞-源井生物
    最近的證據表明,內源性和治療誘導的細胞應激均可觸發不依賴配體的EGFR轉運和信號傳導的健壯,非規範性途徑,基因敲除技術從而為癌細胞提供生存優勢和對治療的抵抗力。研究人員還討論了針對常見潛在起源細胞的臨床前研究,並推測了每種疾病的基因組學如何確定不同的分化途徑。起源 應激誘導的EGFR販運:機制,功能和治療意義 表皮生長因子受體(EGFR)在正常生理和癌症中具有基本作用,使其成為癌症治療的合理靶標。
  • CRISPR-U基因編輯細胞系
    CRISPR-U基因編輯細胞系原理 CRISPR-U是源井生物自主研發的基因編輯技術(基於CRISPR / Cas9技術),CRISPR-U技術比普通CRISPR/Cas9技術的基因切割效率更高,同時可以大幅度提升同源重組效率,輕鬆實現細胞和動物水平的基因敲除(KO)、基因點突變(PM)和基因敲入
  • Crispr基因敲除細胞系系統分析-源井生物
    基因敲除細胞系的前提條件性,是要一種用於消除某些組織(例如肝臟)中特定基因的技術。該技術對於研究個體基因在活生物體中的作用非常廣泛。它與傳統的基因敲除技術不同,因為它在特定的時間針對特定的基因,而不是從一開始就將其清除。而基因敲除技術的使用消除了許多傳統基因敲除的副作用。在傳統的基因敲除中,胚胎可能由於基因突變而死亡,這使科學家無法研究成年的基因細胞。
  • Crispr基因敲除細胞系系統分析-源井生物
    該技術對於研究個體基因在活生物體中的作用非常廣泛。它與傳統的基因敲除技術不同,因為它在特定的時間針對特定的基因,而不是從一開始就將其清除。而基因敲除技術的使用消除了許多傳統基因敲除的副作用。在傳統的基因敲除中,胚胎可能由於基因突變而死亡,這使科學家無法研究成年的基因細胞。然而某些細胞組織即使可以敲除也不能單獨進行研究,因此該細胞在某些組織中必須是無活性的,而在其他組織中必須保持活性。
  • CRISPR-U基因敲除細胞系-源井生物
    CRISPR-U 是源井生物自主研發的應用於基因編輯細胞系的獨家技術(基於CRISPR / Cas9技術),通過優化基因編輯載體和基因編輯流程,CRISPR-U 技術的基因切割效率和重組效率是普通的CRISPR/Cas9技術的10倍以上,輕鬆實現細胞水平的基因敲除(KO)、基因點突變
  • 一次讀懂基因敲除Vero細胞系-源井生物
    Vero細胞起源於1960年代3月27日的正常成年非洲綠猴的腎臟,是微生物學以及分子和細胞生物學研究(包括涉及對基因的編輯等研究)中最常用的哺乳動物基因細胞系之一。作為需要CRISPR / Cas9技術的基因敲除/敲入。
  • 基因敲除 NCI-H1299細胞系助力肺癌研究-源井生物
    另外,H1299細胞具有TP53基因的純合部分缺失,因此它們不表達會導致其增殖傾向的抑癌p53蛋白。此外,據報導,這些細胞可以分泌肽激素神經調節素B(NMB),但不能分泌胃泌素釋放肽(GRP)。具有這些有趣的特徵,NCI-H1299細胞成為涉及基因敲除,基因敲入和點突變的生物學領域的流行基因敲除細胞系。 肺癌是全世界男性和女性中第二大最普遍,最致命的惡性腫瘤。
  • 熱議的「基因敲除」如何實現,拿錘子敲掉基因?
    這樣理解也是可以的,畢竟這句話已經道出了基因敲除的本質,只是還稍微有點片面而已。 基因敲除的正式定義是這樣的:用人們已經知道其序列的細胞外DNA片段,與目標細胞內的相似基因進行同源重組,結果要麼是重組位置的基因被外來基因代替,要麼是重組位置的基因被沉默。 說簡單點,所謂基因敲除就是使某個序列已知但功能未知的基因失去作用,讓生物失去某些功能,從而研究這個基因的功能的技術。
  • 基因敲除A549細胞系你不能錯過的文章-源井生物
    該細胞系目前被用作體外和體內模型,通過一些基因編輯技術(例如CRISPR / Cas 9)研究肺癌和正在開發的藥物療法,這使A549成為適合基因敲除的細胞系。基因敲除的定製過程。A549細胞的快速繁殖可以歸因於環氧合酶2的顯著表達。在體外培養A549細胞時,它們通常會生長成附著或緊密依附著培養基的單層細胞。