細胞能量代謝,Seahorse來檢測

2021-02-23 上海市同仁醫院訂閱號

接下來，我們來了解細胞能量代謝分析儀是如何來工作的。氧消耗、糖酵解的檢測是對細胞代謝監控的有效方法，同樣也是當下研究熱點。Seahorse通過測定氧氣消耗速率(Oxygen Consumption Rate, OCR)來反映細胞線粒體的功能，通過測定細胞外酸化速率(Extra Cellular Acidification Rate，ECAR)來反映糖酵解功能，以表徵細胞的代謝狀況。細胞接種到專用細胞培養板中，將不同藥物（oligomycin、FCCP、抗黴素A和寡黴素的混合物）加入到探針板中探針四周的加藥口中。然後運行預先設定的程序藥物依次注入孔中，實時測定藥物誘導的細胞代謝動態變化。

OCR用來檢測細胞的耗氧量，在加oligomycin之前顯示的數值是細胞的基礎耗氧量，包括線粒體氧化磷酸化及質子漏耗氧。oligomycin是ATP合酶抑制劑，加入此藥後減少的耗氧代表的是機體用於ATP合成的耗氧量，間接顯示此時細胞的ATP產量。FCCP是一種解偶聯劑，加入FCCP後耗氧的增加代表線粒體的最大耗氧能力，間接顯示最大的呼吸能力，而其相對與基礎值的高值代表其還具有的呼吸潛力。第三次加入的藥物是抗黴素A和寡黴素的混合物，二者是呼吸鏈抑制劑，完全阻止線粒體耗氧。即可得到如下的OCR-Time曲線。

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