實驗專欄丨JC-1線粒體膜電位染色教程來了,快上車

2021-03-01 中洪博元醫學實驗幫

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JC-1是一種廣泛用於檢測線粒體膜電位的理想螢光探針。JC-1染料表現出電勢依賴性的積聚在線粒體內。正常線粒體內,JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物,聚合物發出強烈的紅色螢光(Ex=585 nm,Em=590 nm);不健康的線粒體由於膜電位的下降或喪失,JC-1隻能以單體的形式存在於胞漿中,產生綠色螢光(Ex=514 nm,Em=529 nm)。因此顏色的變化非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。線粒體的去極化程度也可以通過紅/綠螢光強度的比例來衡量。

培養板、酒精燈、移液槍、CO2培養箱、流式細胞儀等;PBS、Incubation Buffer、JC-1等。

取細胞,吸除培養液,用PBS洗滌細胞兩次,取1× Incubation Buffer並預熱至37℃,吸取500ul 1× Incubation Buffer,加入1ul JC-1,渦旋混勻配成JC-1工作液,取500ul JC-1工作液將細胞均勻覆蓋,37℃,5%CO2的培養箱中孵育15-20min,用1×Incubation Buffer洗滌細胞兩次,消化離心,用1×Incubation Buffer重懸細胞,用流式細胞儀(BD,美國)檢測。

1、稀釋JC-1時要迅速,否則易聚集,不易溶解。

2、JC-1如果一次使用量較小,需把每管再適當進行分裝,儘量避免反覆凍融。

3、 JC-1在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解後使用。

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