PCR由變性、退火、延伸三個基本反應步驟組成

2020-12-01 中國教育裝備採購網

      上海皓莊儀器有限公司皓莊(LNB)品牌基因擴增儀PCR儀之PCR技術闡述DNA的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,並設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外複製。

  但是,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,每次循環都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,制約了PCR技術的應用和發展。發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對於PCR的應用有裡程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,並逐步應用於臨床。

  上海皓莊儀器有限公司皓莊(LNB)品牌基因擴增儀PCR儀之PCR工作原理:

  類似於DNA的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間後,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留複製鏈重複循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

上海皓莊儀器有限公司是一家立足上海,輻射全國的技術創新型高科技企業.公司擁有一流的技術人員和良好的技工隊伍,具備先進的技術和較強的開發實力.公司成立以來,產品和服務被廣大客戶認可,具有良好的口碑.公司秉承"誠信.專業.創新.成長"的經營理念為客戶提供精心的服務.公司主要經營和生產範圍有:檢測儀器,實驗室設備,清洗設備,環保設備及承接非標產品的設計定製等並提供相關技術服務.

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    PCR基本反應步驟擴增的特異性取決於引物與模板DNA的特易結合,基本反應步驟分三步:1、變性(Denaturation):加熱使模板DNA雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈。反應初期,原來的DNA擔負起使模板的作用,隨著循環次數的遞增,由引物介導延伸的 片段急劇增多而成為主要模板,最終的擴增產物是介於兩種引物5'端之間的DNA片段。
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  • PCR擴增分離目的DNA片段
    一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用,掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。