應選擇較低內毒素的血清中來培養細胞

2020-10-21 DY締一生物

生物醫學研究廣泛使用體外培養細胞作為細胞實驗的模型。其中,細胞狀態與實驗進行息息相關。細胞狀態又與培養基密切相關。

胎牛血清和新生牛血清是常用的細胞培養基添加成分。基礎培養基只含胺基酸、維生素、葡萄糖、丙酮酸鈉、無機鹽等基礎成分,胎牛血清或新生牛血清能提供活性生長因子、激素、胺基酸以及其他更豐富的營養成分,如轉鐵蛋白、胎球蛋白以及其他糖蛋白等。

作為天然培養基,胎牛血清和新生牛血清在細胞培養中佔有重要的位置。但同時由於其採血過程的複雜性,需避免受到外源性汙染。

【內毒素】原本是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有結構,主要化學成分是脂多糖中的類脂A成分。它對細胞有著多方面的影響。

內毒素在細胞傳代增殖過程中,會直接參與細胞凋亡的過程,一定劑量下,會給細胞培養帶來很多問題,特別是免疫細胞和幹細胞,例如:誘導免疫細胞釋放炎症因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。又有人發現,在幹細胞體外培養實驗中,由於幹細胞的乾性,它對內毒素非常敏感,所以,當血清內毒素偏高時,細胞很容易死亡。

因此,血清中內毒素含量越低,對細胞毒性越小,越利於細胞的生長和傳代;反之,內毒素含量過高,會直接導致細胞狀態不良,提前老化,甚至死亡。

因此用於細胞培養的牛血清,要通過嚴格的內毒素水平檢測,通過內毒素的檢測數值,對血清的品質進行分級和評估。

通常國際上要求血清中內毒素含量≤10EU/ml,此時血清被定為特級。

市面上一款Ausbian品牌的進口系列牛血清,目前均來自澳洲,經過嚴格篩選,只挑選內毒素極低的特級血清進口到中國。

所有批次內毒素都低於3EU/ml,其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內毒素血清,更利於細胞的生長和傳代。

因此,血清需要在試用前提早參看該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。

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    牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用於動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。 1.提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。 2.
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  • 牛血清在細胞培養中如何操作及遇到的問題
    2.取4000個左右的HeLa細胞加入到每行的孔(在加之前要震蕩培養基)。本實驗經計數後應加11μL細胞。 3.在A和H行中孔加入89μL含標準血清(2004.12)的培養基。(對照組) 4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標準血清的培養基。
  • 細胞培養的一些問題
    幾乎所有的細胞對穀氨醯胺有較高的要求,細胞需要穀氨醯胺合成蛋白質,在缺少穀氨醯胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的穀氨醯胺。穀氨醯胺在溶液中很不穩定,應置-20 ◦C冰凍保存,用前加入培養基中。加有穀氨醯胺的液體培養基4 ◦C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的穀氨醯胺。
  • 今日技術推薦-細胞培養知識
    HS (horseserum) 則是指馬血清。6 培養細胞時應使用5 % 或10% CO2?或根本沒有影響? 一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩衝系統, 而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。
  • 細胞培養中出現黑點是汙染嗎?如何處理?
    一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然後,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否遊動。如果,細胞被汙染,細菌則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。
  • 胎牛血清應該怎麼選?
    儘管近年來無血清培養基和非動物來源的培養基越來越受到關注,但目前大部分細胞還無法適用這些培養基,並且存在費用較高和細胞生長較緩慢的缺點,因此,含有FBS的完全培養基仍然是目前主流的細胞培養體系。把細胞養好的三個關鍵要素是:良好的細胞來源,正確的實驗操作,以及合適的培養體系。
  • 培養細胞前的準備工作
    1、選擇正確的培養基在養細胞之前,就要了解,你所養細胞的來源以及種類和名稱,查閱一定量的文獻,確定所需培養液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細胞培養液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見的細胞基本可以使用這幾種培養基中的一種來培養,有的需要加入一定其他成分,這需要根據不同的細胞類型,查ATCC細胞庫或者查文獻