培養細胞前的準備工作

2020-12-04 締一0601

對於新手來說,細胞培養真是太難了,很多的細節你不可能一下子就考慮到、預見到,因此請教細胞培養的高手就顯得非常重要且可貴了。 細胞培養包括儀器的清洗、消毒滅菌,試劑的購買、配製、分裝,細胞的分離,無菌操作,培養細胞的觀察,實驗的設計,及結果的分析等等。但這每一個過程的含金量都很高,要求非常嚴格。

今天分享實驗室培養人員的培養細胞的心得,希望給做細胞培養新手啟發。怎麼才能培養出符合條件的細胞呢?

1、選擇正確的培養基

在養細胞之前,就要了解,你所養細胞的來源以及種類和名稱,查閱一定量的文獻,確定所需培養液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細胞培養液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見的細胞基本可以使用這幾種培養基中的一種來培養,有的需要加入一定其他成分,這需要根據不同的細胞類型,查ATCC細胞庫或者查文獻,才能找到所需最佳培養液。選擇正確的培養液是養好細胞的第一步。

2、了解細胞的生長習性

不同的細胞生長習性不同。如成纖維細胞是貼壁生長,有一定的密度依賴性,密度小可能會出現不增殖,狀態差的情況,接種密度大時則需要隔天傳代,頻繁傳代則影響細胞狀態;再如RPMI-8226人多發性骨髓瘤細胞,是懸浮生長的,傳代需離心棄去上清即可。總之,了解細胞生長習性,再加上正確的計數,才能掌握好傳代的密度。

3、選擇優質的血清

血清中含有細胞生長所必須的生長因子,作為哺乳動物細胞培養的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,選擇優質的血清,是細胞養殖成功與否的關鍵!

4、及時傳代和更換培養液

在細胞增殖到一定的密度後,要及時傳代,根據細胞的生長速度和密度,及時更換培養液。更換過勤,浪費培養液,更換不夠及時,則細胞狀態轉差,一般需隔天更換培養液,具體可根據所養細胞種類予以調整。

5、絕對的無菌意識

前面林林總總全部都注意好了,如果無菌意識差,細胞中混入了微生物,則千裡之堤潰於蟻穴,細菌的生長速度和破壞力,將迅速佔領培養皿,破壞細胞結構,有些初學者會在培養液中加入1%的雙抗,但是,無菌意識不強,雙抗亦無法拯救你的細胞!

6、傾心的呵護,頻繁的觀察

做到以上幾點,就可以開始養你的細胞了,但是再次重申細胞嬌弱,在養細胞的過程中,難免會出現一些意想不到的問題,要想成功養好細胞,時時惦記它 ,頻繁地觀察,初期一天觀察2次都不足為過,出現任何預料外的情況,及時處理,才能保障收穫一盤「漂亮」的細胞。

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胎牛血清的主要作用:

1. 提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。

2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調節它們所結合的物質活力。

3. 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。

4. 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

5. 起酸鹼度緩衝液作用。

6. 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩餘胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

7. 參與細胞凍存。

在細胞培養中,胎牛血清加入基礎培養基的濃度大多為5%~20%(最常見為10%)的。具體到不同試驗,應依據文獻報導,或細胞類型或基礎培養基的成分來確定最佳濃度。

胎牛血清應在-20℃儲存,運輸應乾冰冷鏈運輸,避免反覆凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優良品質。

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