傳代培養是指需要將培養物分割成小的部分，重新接種到另外的培養器皿(瓶)內，再進行培養的過程。對單層培養而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。
傳代培養中的細胞傳代培養(subculture)，當原代培養成功以後，隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利於生長或發生中毒。
[實驗步驟]
準備工作：
1)肥皂洗手，在進行無菌操作前，用75% 的酒精擦拭雙手，注意指間，和指甲周圍。同時，用酒精棉球擦拭超淨臺。上海創賽科技提供95%藥用酒精，Alcohol(95%)，藥用級，64-17-5，商品編號：C16-A11087-500ml，價格25元。
2)將培養液放置室溫，備用。
3)打開超淨臺內的紫外燈，照射20 min。同時，將實驗所需材料也放入超淨臺進行滅菌(血清、培養基除外)上海創賽科技提供Gibco RPMI 1640培養基，商品編號：C11875500BT-500ml，價格68元。
4)倒置顯微鏡下，觀察細胞的狀態，是否已經長滿培養瓶，需要進行分瓶。
實施工作：
1)關閉超淨臺的紫外燈，打開風機。
2)點燃酒精燈，取出刻度吸管，在火焰上略燒，然後，安上吸球待用。
3)在打開培養瓶之前，用酒精棉球擦拭瓶蓋，打開後，瓶口在酒精燈上過火焰，再用吸管輕輕吸出舊的培養液，注意，吸管不要碰到布滿細胞的培養瓶的側壁。上海創賽科技提供250ml一次性細胞培養瓶(標準型)表面處理，商品編號：C81-TCF011025-12.5cm²，濾膜蓋200隻/箱，價格672元。
4)將胰酶加入培養瓶內,顯微鏡下隨時觀察，見到細胞的突起消失，變圓時，立即翻轉培養瓶，吸出胰酶。記住不要消化時間過長，否則，細胞會被胰酶消化掉。上海創賽科技提供胰酶，Pancreatin，USP級，8049-47-6，商品編號：C16-P10849-50g，價格85元。
5)加入適量Hanks液或培養基清洗一遍，立即倒掉。
6)加入含有10%血清的培養基，用吹打管吹打，一定要輕輕吹打，使其從瓶壁上脫落分散到培養基中，再補加培養基，按1:3進行分瓶。然後，用火焰燒培養瓶的瓶口和蓋，再蓋好培養瓶的蓋，放到培養箱中進行培養。
以上介紹的是貼壁細胞的傳代培養方法，對於懸浮細胞的傳代培養方法，只需要將細胞進行離心，1000 rpm，5 min,然後，換入新的培養基即可。再分裝到不同的培養瓶中進行培養。
不健康的細胞質中有空泡，細胞內有顆粒樣物質，細胞間空隙增大，變形，不規則，失去原有的特點。
實驗注意：
傳代或換液24~ 48 h注意觀察細胞是否被汙染，汙染的細胞培養液變渾濁，鏡下可見有大量菌絲。如果細胞生長緩慢，生長特性改變，胞質內顆粒性物質增多，儘管培養液不變渾濁，考慮可能有支原體汙染。汙染的細胞立即從培養箱中取走，以免汙染其它細胞。
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