一套足以解決99%常規實驗問題的蛋白質檢測生物實驗技術指南

2020-09-24 非編碼RNA研究園地

是不是還在頭疼實驗時遇到的問題該如何解決？是不是還在煩惱沒有一個完整的指導手冊，不要擔心，不要害怕。今天小喵就給你們帶來了——《蛋白質檢測相關生物實驗技術指南》，一套足以解決99%常規實驗問題的技術指南。

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DNA實驗技術

cDNA文庫構建

DNA的瓊脂糖凝膠電泳

Southern Blot原理及實驗方法

SSR分子標記實驗操作及其注意事項

變性梯度凝膠電泳

單核苷酸多態性（SNP）實驗

動物基因組DNA的提取

基因定點突變

甲基化檢測原理及步驟

凝膠遷移實驗（EMSA）

染色質免疫共沉澱（ChIP）實驗

質粒DNA的提取

重組質粒的連接、轉化及篩選

PCR實驗技術

AFLP原理和操作

ddRT-PCR%28差示反轉錄PCR%29

PCR-SSCP實驗操作詳細步驟

PCR產物的TA克隆%28DNA的膠回收和連接%29

降落PCR

聚合酶鏈式反應%28PCR%29基本操作步驟

目的基因PCR擴增產物的克隆

逆轉錄-聚合酶鏈反應%28RT-PCR%29

普通PCR、原位PCR、反向PCR和反轉錄PCR的基本原理和操作步驟

實時螢光定量PCR具體實驗步驟

限制性片段長度多態性實驗（RFLP）

原位PCR技術基本原理

重疊延伸PCR實驗

RNA實驗技術

mRNA的分離純化

Northern Blot原理及實驗方法

RNA幹擾實驗

RNA瓊脂糖凝膠電泳

siRNA表達載體的構建

石蠟切片%28蘇木精-伊紅對染法%29

螢光原位雜交實驗（FISH）

原位雜交實驗

蛋白質免疫實驗技術

ELISA步驟、試劑及注意事項

Western blot詳細操作步驟

病毒感染細胞實驗整體流程及原理

蛋白質的表達、分離、純化實驗

蛋白質含量的測定

蛋白質膠的製備

等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點

免疫共沉澱Co-IP實驗操作步驟

免疫組化實驗

雙向電泳操作步驟及相關試劑配製

感受態細胞的製備及其轉化技術

IPTG誘導蛋白表達的原理及方法步驟

畢氏酵母%28Pichia_pastoris%29感受態細胞製備及轉化

大腸桿菌感受態細胞製備實驗（CaCl2法）

大腸桿菌轉化實驗（熱擊法）

感受態細胞製備及轉化實驗（全）

農桿菌感受態細胞的製備與轉化

細胞轉染操作方法及各方法比較

真核細胞轉染操作方法

質粒轉染實驗步驟


生物實驗指南

Experiments_in_the_Purification_and_Characterization_of_Enzymes

生物醫學組織培養-BiomedicalTissueCulture

蛋白質純化與鑑定實驗指南

動物細胞培養：基本技術指南（第五版）

基因的分離與鑑定

細胞實驗指南（下）

細胞凋亡的原理及不同信號通路

細胞培養手冊-Cell_culture_basic_handbook

小議在MTT法測細胞增殖抑制率中IC_50_的計算方法


細胞實驗技術

B淋巴細胞分離技術

MTT法測定細胞相對數和相對活力

transwell實驗方法

TUNEL法檢測細胞凋亡實驗原理和方法

T淋巴細胞分離技術

流式細胞儀檢測細胞凋亡操作流程

細胞凋亡檢測方法匯總

細胞遷移實驗28%細胞劃痕法29%

細胞原代培養、傳代培養、凍存和復甦

細胞增殖檢測MTT法

原代細胞培養和傳代培養的方法

原代細胞培養與分離


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    （圖片來源於網絡）常見問題：在免疫沉澱實驗後的WB驗證環節中，當使用常規的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時如果檢測的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近時，就會受到這兩條帶的幹擾。一般解決辦法：選擇不同種屬來源的一抗分別進行IP和WB實驗，然後再選擇無種屬交叉反應的二抗進行WB實驗；這種方案相對來說比較昂貴，需要買兩個一抗和兩個對應的二抗。
  • 教你學好高中生物:落實常規親歷實驗日常應用
    原標題：落實學習常規 親歷實驗過程 日常學以致用 名師教你學好高中生物二、凡人之性成於習、落實學習常規高中的知識兼具廣度與深度。落實學習常規是學好生物學知識的重要保障，包括預習、聽課、複習、作業和總結五步。建議在預習時，用鉛筆將自己認為是重點的內容劃出來，將自己看不懂的內容標出來，將預習後生成的問題記下來，使自己的聽講更加有的放矢。聽講最重要的是聽思路。
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    成果簡介：微流控晶片是空間生物實驗與生命信息探測的最新技術。「微流控晶片」 被美國宇航局譽為空間生物學實驗的「終結者」。微流控晶片是當前微全分析系統發展的熱點領域。結合空間生命特徵分子的特點，發展高集成度晶片和晶片檢測技術將是一項成本低、信息量高、簡便易行的創新技術。此技術的研究和應用將為我國空間生命科學研究提供先進的技術手段。
  • 質譜檢測法與蛋白質分析
    這兩項技術解決了生物大分子的離子化問題，它們的出現，極大地推動了質譜技術的發展，我們終於可以使用質譜技術來分析蛋白質組成問題了。因此，我們應該根據實驗目的的需要以及實驗設計安排來確定該使用哪種質譜儀。要想用全掃描模式（full scanmode）獲取定量數據的同時再用MS/MS模式獲取定性數據是一件非常困難的事情。不過某些「雜交」質譜儀，比如LIT-ICR質譜儀，由於它們能夠平行採集數據，因此可以部分解決上面那個問題。
  • 蛋白質純化與結晶的原理 實驗
    運用重組基因的技術，將特定基因以選殖（clone）的方式嵌入表現載體（expression vector）內，此一載體通常具有易於調控的特性。之後再將帶有特定基因的載體送入可快速生長的菌體中，如大腸桿菌（Escherichia coli），在菌體快速生長的同時，也大量生產表現載體上的基因所解譯出之蛋白質。一般而言純度越高的蛋白質比較有機會形成晶體，因此純化蛋白質的步驟就成為一個重要的決定因素。
  • 技巧篇 | 蛋白質印跡常見問題及解決辦法
    蛋白質印跡（Western Blot）是根據抗原抗體特異性結合的原理檢測複雜樣本 中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進行單向或雙向電泳，經過 PAGE 分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白 質，且能保持電泳分離的類型及其生物學活性不變。
  • 實驗專欄丨親和層析法純化抗體技術指南來了!
    在多種不同的技術中，親和層析是純化抗體最具選擇性、快速和容易的純化方法。 （請耐心花2分鐘閱讀完本文，建議推薦給小夥伴一起學）親和層析是液相層析方法中選擇性和通用性最好的技術，依賴於蛋白及其配體的可逆性定點結合，如激素與其受體，酶與其底物，抗體與抗原等。
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    使用前，將濃溶液稀釋成工作液（10 pmol/ml或20 pmol/ml）後進行實驗。 4.如何檢測引物的純度？ 實驗室方便的作法是用PAGE方法。 如果一切正常，還無法解決問題時，我們可以免費重新合成引物。 7.測定了引物的OD值後發現A260/A280<1.8，引物的純度合格嗎?
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    2020年2月6日，國家衛生健康委發布了新型冠狀病毒感染的肺炎防控方案（第四版），同時作為附件發布了新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南（第四版）。為指導各級疾控部門和其他相關機構開展新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測工作，特制定本技術指南。本指南主要介紹目前已經比較成熟、易於實施的核酸檢測方法。
  • 實驗時間 | WB 詳解(原理、試劑、步驟及問題解答)
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  • 遼寧長生生物公司成功自主研發新冠病毒實驗鼠
    本報訊【記者 尤勇】 近日，遼寧長生生物技術股份有限公司自主研發培育的首批新冠ACE2敲除鼠正式面市銷售，標誌著該公司的科研和生產水平已經躋身國內實驗動物產業的第一陣營。新冠病毒實驗鼠的研發可謂千帆競發，前三家研發成功的單位都是中科院動檢所這樣的業內「大咖」。
  • 高中生物實驗答題模板
    高中生物實驗答題模板今天給大家說說實驗的問題，高中生物實驗大概有20個，當然這些都是需要你熟練的。其中有些是考試中經常出現的。
  • ...DeepMind AI解決生物學50年來重大挑戰,破解蛋白質分子摺疊問題
    弄清蛋白質摺疊成何種形狀被稱為「蛋白質摺疊問題」。在過去 50 年裡，蛋白質摺疊一直是生物學領域的重大挑戰。　　DeepMind 的 AlphaFold 讓人類在這一問題上取得了重要突破。在今年的國際蛋白質結構預測競賽 CASP 中，DeepMind 開發的 AlphaFold 最新版本擊敗了其他選手，在準確性方面比肩人類實驗結果，被認為是蛋白質摺疊問題的解決方案。