柱層析法的原理和方法

1、要控制淋洗劑流出的速度。

一般控制流速為1滴/秒。若流速太快，樣品在柱中的吸附和溶解過程來不及達到平衡，影響分離效果。若流速太慢，分離時間會拖得太長。有時，樣品在柱中停留時間過長，可能促成某些成分發生變化。或流動相在柱中下行速度小於樣品的擴散速度，會造成色帶加寬、交合甚至根本不能分離。

a. 色帶過寬，界限不清。造成的原因可能是柱的直徑與高度比選擇不當，或吸附劑、淋洗劑選擇不當，或樣品在柱中停留時間過長。但更常見的卻是在加樣時造成的。若在樣品溶液加進柱中後，沒有打開下部活塞放出淋洗劑使樣品溶液降至濾紙片處，即急於加溶劑衝洗柱壁，造成樣品溶液大幅度稀釋，或過早加大量溶劑淋洗，必然會造成色帶過寬。所以溶樣時一定要使用儘可能少的溶劑，加樣時一定要避免樣品溶液的稀釋。

b. 色帶傾斜。正常情況下柱中的色帶應是水平的，如圖a 所示。而傾斜的色帶如圖b所示，在前一個色帶尚未完全流出時，後面色帶的前沿已開始流出，所以不能接收到純粹的單一組分。造成色帶傾斜的原因是吸附劑的頂面裝得傾斜，或柱身安裝得不垂直。

c.氣泡。造成氣泡的原因可能是玻璃毛或脫脂棉中的空氣未擠淨，其後升入吸附劑中形成氣泡，也可能是吸附劑未充分浸潤溶脹，在柱中與淋洗劑作用發熱而形成，但更大量的是在裝柱或淋洗過程中淋洗劑放出過快，液面下降到吸附劑沉積面之下，使空氣進入吸附劑內部滯留而成。

d.柱頂面填裝不平。這時色帶前沿將沿低凹處向下延伸進入前面的色帶(見圖d)，這也是一種溝流。

e.斷層和裂縫。當柱內某一區域內積有較多氣泡時，這些氣泡會合併起來在柱內形成斷層或裂縫。圖e表示了裂縫造成的溝流，而斷層相當於一個不平整的裝載面，它造成溝流的情況與圖d相似。