月黑風高夜,四下無人時,實驗大樓在月光的映照下顯得格外素淨。
突然,只聽樓裡傳來一陣哀怨:「我掏心掏肺地對你們,你們卻如此狠心,離我而去。」尋聲望去,只見一位白衣女子,抱著培養基在放聲哭泣。
相信有很多實驗汪都會遇到這樣的情況,下面,就為大家介紹下,關於細胞凋亡中,你不知道的那些事。
細胞凋亡的分子機制
凋亡可被多種細胞信號激活,如鈣穩態失衡、氧化損傷、線粒體損傷、毒素、生長因素和激素刺激等。細胞凋亡過程大致分為:凋亡信號轉導凋亡基因激活細胞凋亡的執行凋亡細胞的清除。經典的細胞凋亡機制可分為內源性信號通路和外源性信號通路兩種。
內源性凋亡信號通常激活線粒體途徑。凋亡蛋白 Bid 誘導凋亡蛋白 Bcl-2 拮抗劑 Bak 和 Bcl-2 結合蛋白 Bax 的激活,它們形成的聚合體插入線粒體外膜引起膜電位下降和細胞凋亡關鍵蛋白的釋放,如細胞色素 C、SMAC / DIABLO 及凋亡誘導因子(AIF)等,激活 Caspase 級聯反應,從而誘發細胞凋亡。
外源性死亡受體途徑開始於特異性死亡受體與配體結合,如 FasL(CD95)或 TNFR1 分別和配體 Fas 或 TNF-α 結合,使死亡受體的結構域寡聚化,後募集 Caspase-8 和銜接蛋白 FADD 形成死亡誘導信號複合體 DISC。
激活的 Caspase-8 引發後續 Caspase 級聯反應促進細胞死亡,它還能與 Bid 相互作用激活內源性通路。
細胞凋亡的檢測方法
細胞生命的終結有許多種方式,凋亡只是其中一種,所以要確保自己檢測到的的確是凋亡信號。
細胞凋亡的檢測方法也有多種,如形態學檢測、磷脂醯絲氨酸外翻分析(Annexin V 法)、線粒體膜勢能檢測、DNA 片斷化檢測、TUNEL 法及 Caspase-3 活性檢測等,可根據自己的實驗需求選擇合適的方法。
區分凋亡和壞死
1)可將二者區分開的方法:瓊脂糖凝膠電泳,形態學觀察(透射電鏡是是區分凋亡和壞死最可靠的方法),Hoechst33342/PI 雙染色法流式細胞儀檢測,AnnexinV/PI 雙染色法流式細胞儀檢測等。
2)不能將二者區分開的方法:原位末端標記法、PI 單染色法流式細胞儀檢測等。
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