DNA分子克隆技術是分子生物學研究中最經常使用的技術之一。半個世紀前出現的酶切-連接克隆技術打開了基因工程研究的大門。但酶切-連接克隆受酶切位點的限制，並且操作比較繁瑣。因此，不依賴酶切位點的基因重組技術Gateway克隆受到了眾多實驗室的歡迎，被廣泛用於各類載體構建。但是Gateway克隆也存在幾個缺點：1.不能直接使用PCR產物，需要先構建入門克隆。2.不能無縫克隆，留下至少25bp的疤痕（scar）序列。3.不易進行多片段克隆。4.試劑盒價格昂貴。
為解決Gateway克隆的缺點，中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所的言普副研究員等人開發了一種新型的標準化分子克隆技術──NimbleCloning。該系統目標載體的克隆位點處設計有通用接頭-SfiI-ccdB-SfiI-通用接頭的結構，帶有20bp通用接頭序列的目標DNA直接與環狀目標載體混合，在SfiI限制性內切酶和T5核酸外切酶混合反應液作用下完成克隆。其克隆反應原理為：由SfiI切開環狀載體，T5核酸外切酶在線性DNA兩端沿5＇-3＇方向進行消化，目標基因和載體兩端由於設計有重疊序列，消化後露出的互補DNA單鏈能夠結合，轉化大腸桿菌後即可獲得重組克隆。
NimbleCloning技術原理示意圖
Nimble Cloning較好地解決的Gateway克隆的缺點：1.Nimble Cloning 既可使用PCR產物，也可使用入門克隆。2.Nimble Cloning既可使用通用接頭進行標準化克隆，也可進行無縫克隆。3.Nimble Cloning可方便地進行多片段克隆。4. Nimble Cloning為國產分子克隆系統，價格只有Gateway克隆的1/10。
為了方便Nimble Cloning技術的推廣使用，言普等還開發了一系列配套的pNC系統表達載體，包括原核表達、酵母雙雜交、植物超過表達、植物RNAi、植物亞細胞定位、植物BiFC、植物基因編輯、植物VIGS、哺乳動物表達載體等，初步形成了一個標準化的克隆系統，為基因功能研究提供了一個便利的平臺。該套載體向科研人員開放共享，可免費索取使用（Email:yanpu@itbb.org.cn,QQ:328995517）。
NimbleCloning系統表達載體
該技術近期以《Nimble Cloning: ASimple, Versatile, and Efficient System for Standardized Molecular Cloning》為題發表在國際期刊Frontiersin Bioengineering and Biotechnology。該技術在發表論文前，已在十多家科研單位使用，取得了良好的使用效果，有望成為分子克隆領域的標準系統。
參考文獻：
Nimble Cloning: A Simple, Versatile, and Efficient System for Standardized Molecular Cloning
DOI: 10.3389/fbioe.2019.00460
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5、據說，這是生物醫學碩士博士生的真實的生活寫照