沃特世18種鄰苯二甲酸鹽UPLC/MS/MS分析解決方案

風起「雲」湧
——沃特世18種鄰苯二甲酸鹽UPLC/MS/MS分析解決方案
 

　　近日，臺灣媒體報導了起雲劑遭受增塑劑汙染的事件，導致食品安全檢測市場頓時風起「雲」湧，鄰苯二甲酸鹽的檢測再度成為人們關注的焦點。

　　起雲劑(又名渾濁劑、乳濁劑、增濁劑)也就是我們常說的乳化穩定劑。主要應用於飲料和奶類製品。在飲料中使用，有助於釋放與保留果汁飲料的香氣，包埋果汁飲料的異味、雜味，也能增強果汁飲料口感的潤滑性、厚實感，尤其是有效改良果汁飲料的天然感觀，顯著提高果汁飲料的品質質量。起雲劑的主要成分為風味油、單體香油、增重劑、乳化穩定劑、乳化劑、水，它本身對人體並沒有危害，本次事件的發生是由於少數起雲劑生產廠家為降低成本使用在食品中禁用的增塑劑類物質鄰苯二甲酸鹽代替原本應該使用的棕櫚油，從而引發了食品安全事件。

　　確保食品添加劑或者食品本身是否含有鄰苯二甲酸鹽類物質的一個途徑就是使用分析手段對其進行檢測。

　　我們常說的鄰苯二甲酸鹽是一類結構比較相似的化合物，在2011年6月，中國衛生部將17種鄰苯二甲酸鹽類物質列入《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單(第六批)》名單，如下：

　　鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、

　　鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP)、

　　鄰苯二甲酸二苯酯(DPP)、

　　鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、

　　鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、

　　鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、

　　鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、

　　鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)、

　　鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)、

　　鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、

　　鄰苯二甲酸二環己酯(DCHP)、

　　鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、

　　鄰苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、

　　鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、

　　鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、

　　鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、

　　鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)

　　本方法介紹了兩種基於沃特世超高效液相色譜技術(UPLC技術)分析18種(含臺灣FDA要求)鄰苯二甲酸鹽的方法，方法一為採用沃特世超高效液相色譜質譜聯用技術(UPLC/MS/MS)，該方法具有分析速度快，靈敏度高的特點。適用於實驗室擁有質譜系統並追求檢測靈敏度的用戶。方法二為採用沃特世超高效液相色譜系統和二極體陣列檢測器(UPLC/PDA)分析方法，適用於暫時還不具有質譜系統的用戶。

　　樣品提取(臺灣FDA方法)：

　　取混勻後樣品1g，精確稱量，置於50ml容量瓶，加入約45ml 甲醇，超聲波震蕩30min, 冷卻後用MeOH 定容到50ml。靜置後，取上部溶液約5ml置於離心管中，於 3500rpm離心10min,取上清液裝瓶,待測。對於基質比較複雜的樣品，對於提取後的樣品可以採用進一步的固相萃取淨化手段。

 【方法一：UPLC/MS/MS方法】

實驗條件

A．UPLC 條件

LC系統：     ACQUITY UPLC H Class系統

色譜柱：   ACQUITY UPLC HSS C18，1.7um，2.1X100mm，

流動相A：0.1%FA水溶液

流動相B：乙腈

流速：0.4ml/min

梯度洗脫:   梯度表 

時間(分)	流速 (ml/min)	A (%)	B (%)	曲線
0.00	0.40	65	35	*
1.50	0.40	25	75	6
2.00	0.40	0	100	6
6.20	0.40	0	100	6
7.50	0.40	65	35	1

進樣體積：10uL
柱溫：35℃,   
樣品溫度：    10℃
強洗溶劑：    ACN 
弱洗溶劑：    H2O :ACN= 95:5
運行時間：    7.5分鐘

B. MS條件:
系統：          ACQUITY UPLC TQD
離子化模式：ESI+
電離電壓：   3.2KV
離子源溫度：120℃
脫溶劑氣溫度：  400℃
脫溶劑氣流量:   650L/Hr

 

 

18種鄰苯二甲酸鹽分析結果（濃度：10ppb）

（DMP、DMEP、DEEP、DEP、DPhP、DEHP、BBP、DIBP、DBP、DBEP、DPP、DCHP、BMPP、DHXP、DNOP、DINP、DNP、DIDP）

部分MRM 通道:

【方法二：UPLC/PDA方法】

A．UPLC/PDA 條件

儀器系統：Waters UPLC H-Class/PDA 

色譜柱：ACQUITY UPLC HSS C18 (1.7um, 2.1×100mm)

波 長：225nm，

柱 溫：45℃，

流 速：0.4mL/min

流動相：A-水，B-乙腈，進行梯度洗脫

18種鄰苯二甲酸鹽色譜分析結果如下圖所示 

保留時間（min）	中文名稱	英文名稱	峰序列
4.482	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	1
4.896	鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	2
8.483	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	3
8.622	鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	4
14.176	鄰苯二甲酸二（2-丙基庚）酯	DPHP	5
15.137	鄰苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	6
15.311	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	7
15.464	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	8
15.616	鄰苯二甲酸二-（3-丁氧基）乙酯	DBEP	9
17.894	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	10
18.013	鄰苯二甲酸二環己酯	DCHP	11
19.416	鄰苯二甲酸二（4-甲基-2戊基）酯	DMPP	12
19.929	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	13
22.644	鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	14
23.103	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	15
23.727	鄰苯二甲酸二異壬酯	DINP	16
24.335	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	17
24.570	鄰苯二甲酸二異癸酯	DIDP	18

飲料基質1加標與空白結果

飲料基質2加標與空白結果

關於Waters ACQUITY UPLC H-Class

HPLC的操作方法，UPLC的卓越性能

如果您正在進行常規分析，或方法開發，或僅僅是喜歡四元泵系統多溶劑的靈活使用，而又渴望獲得UPLC技術帶來的快速、高靈敏度、高分離度的性能，那麼沃特世公司ACQUITY UPLC H-Class系統是您目前唯一的選擇。ACQUITY UPLC H-Class系統是一套經過優化的先進系統，具有四元溶劑混合的靈活性和簡易性，並帶有一個流通式進樣器，可實現UPLC分離的先進性能——高分離度、靈敏度和高通量，同時還保持了ACQUITY系統所被公認的耐用性和可靠性。

選擇ACQUITY UPLC H-Class，您可以在面向未來的LC平臺上繼續運行現有的HPLC方法，並可實現向UPLC分離的無縫轉換。當您一切準備就緒後，即可使用集成系統工具和可靠的色譜柱工具包進行方法轉換和方法開發，以簡化過渡流程。

特色：

多溶劑混合：QSM可將四種溶劑按任何組合或比例混合。使用選配的內部溶劑選擇閥，將可選溶劑擴展到多達九種，方法更加靈活。

直接注射取樣：SM-FTN的針流入路徑採用專門的技術，在高壓力下能夠保證精確的進樣針密封性，可實現高精度注射，具有極佳的樣品回收率。

下一代色譜柱溫箱：我們的新式UPLC色譜柱加熱器和管理器已實現了標準化，具有易於操作、體積小的主動式溶劑預加熱器，使系統之間具有相同的效率。色譜柱預熱器保證了穩定的熱效能；色譜柱管理器提供了多區域的靈活性，溫度範圍為4 至 90 °C ，並可疊加使用。

受控的滯留體積：ACQUITY UPLC H-Class 的SmartStart技術（專利待批）可同時對梯度起始時間和各個預注射步驟進行自動管理。通過將這些典型的連續過程疊加起來，能夠最大程度地縮短循環時間。

關於Waters ACQUITY UPLC TQD

沃特世TQ 檢測器是為一體化的UPLC®/MS/MS定量分析而開發的儀器，達到串聯四極杆MS的最佳選擇性、穩定性、速度及準確性。 為契合UltraPerformance LC® (UPLC)的超高性能，TQ檢測器以最快的速度採集數據。與ACQUITY UPLC®系統一同使用，ACQUITY® TQD 系統為用戶所有的定量分析提供領先的分析檢測限解析度及樣品通量，應用範圍包括：生物分析、ADME篩選、食品安全、環境監測、臨床學、法醫學等。

特色：

l 自動化的系統檢查，用戶界面簡單友好，使用方便，優化的MS/MS檢測，滿足最苛刻的定量分析需求

l 數據採集速度快，色譜峰面積測量方面的準確性、重現性好

l 可靠耐用的ZSpray™ 大氣壓離子源，ESI、APCI、ESCi、APPI、ASAP等各種離子源模式可選

l 工業級領先的多模式檢測能力,一次運行時，可同時進行多模式的採集

l 自動化的儀器優化與定量方法開發工具，精巧的應用軟體工具包，適合用戶的特定分析要求。

l 快速的數據採集能力，(採用T-Wave™ 碰撞池技術、多模式離子化技術、極性快速轉換技術)　

欲了解鄰苯二甲酸鹽分析方法的更多信息，

請撥打800（400）-820-2676

或郵件至[e-mail]