核苷酸可提高嬰幼兒免疫力、維護腸道健康,多用於配方奶粉等嬰幼兒輔食中,因此對嬰幼兒配方食品中核苷酸成分的檢測愈發重要。
檢測標準:GB 5413.40-2016《嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定》
國標檢測難點:核苷酸受基質影響,保留時間漂移;CMP保留弱,受基質幹擾嚴重;國標方法採用離子對試劑來增強核苷酸在反相中的保留;但離子對試劑可能會對色譜柱造成不可逆的損害。
華譜方案:華譜科儀嘗試直接在色譜柱固定相表面修飾正電荷,利用反相加離子交換作用力以增強CMP保留,減少基質幹擾。基於以上思路,華譜開發出Alphasil XD-C18CH色譜柱解決該問題。
儀器:華譜S6000液相色譜
色譜柱:Alphasil XD-C18CH, 4.6 × 150 mm, 5 μm
流動相:磷酸鹽緩衝液-甲醇
流速:1.0 mL/min;
柱溫:20 ℃
檢測波長:254 nm
(1)實際樣品的測定
使用本方案對實際樣品中的核苷酸進行測定,結果如下圖所示,五種核苷酸在Alphasil XD-C18CH色譜柱上能得到較好的分離,且12 min就能完成一針分析。同時實際樣品中的各核苷酸均實現了基線分離,且不受基質雜質幹擾。
(2)檢測限度的測定
測定實際樣品中5種核苷酸的檢測限和定量限,結果如下表所示,限度滿足國標要求。
5種核苷酸檢測限和定量限
(3)重複性的考察
以標準對照品考察方法重複性,連續進樣6針,各核苷酸保留時間與峰面積RSD均滿足要求,該方法在連續進樣時重複性良好。
5種核苷酸對照品重複性色譜圖
本方案靈敏度高,通用性強,是分析乳製品中核苷酸的快速有效手段。
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