科普下免疫印跡法的檢測原理是什麼

2021-01-09 生物幫

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免疫印跡法是在蛋白質電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發展起來的一項檢測蛋白質的技術，它將SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳的高分辨力與抗原抗體反應的高特異性相結合。

第一階段為SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白樣品經SDS處理後帶負電荷，在聚丙烯醯胺凝膠中從陰極向陽極泳動，分子量越小，泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色後才顯出電泳區帶)。

第二階段為電轉移。此階段分離的蛋白質條帶肉眼仍不可見。

第三階段為酶免疫定位。將印有蛋白質條帶的硝酸纖維素膜(相當於包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標第二抗體作用後，加入能形成不溶性顯色物的酶反應底物，使區帶染色醫學|教育網整理。常用的HRP底物為3，3-二氨基聯苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍紫色)。陽性反應的條帶清晰可辨。並可根據SDS-PAGE時加入的分子量標準，確定各組分的分子量。

延伸閱讀：免疫印跡法 (Western blotting) 是一種將高解析度凝膠電泳和免疫化學分析技術相結合的雜交技術。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優點，是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種最常用的方法，如組織抗原的定性定量檢測、多肽分子的質量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。 免疫印跡法(immunoblotting test,IBT)亦稱酶聯免疫電轉移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因與Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法 Southern blot 相類似，亦被稱為Western-blot.

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