好不容易完成一個重組蛋白的表達純化，結果卻內毒素含量超標，這可該怎麼辦怎麼辦啊？
那麼，內毒素是什麼東西呢？為何會影響重組蛋白的使用呢？
內毒素（Endotoxin）是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有結構。細菌在生活狀態時不釋放，只有當細菌死亡自溶或粘附在其他細胞時，才表現其毒性，主要由多糖、脂質和蛋白質組成複合體。內毒素直接作用於人體，激活組織內的炎性細胞和炎症因子，導致機體發熱並引發全身性炎症反應，繼而引起彌散性血管內凝血、休克、多臟器功能衰減等。
內毒素會與細胞膜上的受體結合引起免疫反應，對細胞有較強的毒性作用，從而影響體內或體外細胞的生長和功能。因此，在免疫學實驗、細胞培養實驗、細胞治療、細胞凋亡研究以及幹細胞培養與擴增分化中，使用到蛋白因子都需要低內毒素。在細胞因子功能分析、蛋白相互作用等研究中也必須使用低內毒素的重組蛋白。以重組蛋白作為抗原，生產高質量的抗體更是需要低內毒素的重組蛋白。
內毒素超標，會嚴重影響重組蛋白的使用，怎樣操作才可以避免呢？
首先，在蛋白的表達純化過程中要使用注射用水，儘量減少內毒素的產生。在重組蛋白製備過程中，所有用到的緩衝液、液體試劑、培養基等均用注射用水配製，防止引入內毒素。
製備注射級用水設備其次，選擇原核表達系統以外的平臺，比如CHO穩定細胞株表達平臺、HEK293穩定細胞株表達平臺、昆蟲杆狀病毒表達平臺及酵母細胞表達平臺。內毒素大多是原核細菌產生的，避免原核表達系統，可以減少重組蛋白產品的內毒素含量。
低內毒素表達系統第三，高通量親和純化系統，本身就是一種去除內毒素的理想方法。在蛋白純化過程中，採用親和層析過柱法，極大的降低了產品的內毒素含量。
親和層析純化系統第四，GMP生產線，整個製備過程無菌，使得重組蛋白的內毒素含量低於低於0.01EU/ug。
低內毒素GMP車間如果製備的重組蛋白內毒素超標了，還是有辦法「拯救」的，可以選擇超濾法或親和層析去除。
內毒素去除方法當然最好的方法還是表達純化的重組蛋白內毒素含量合格，所以，如果有重組蛋白表達純化需要時，要根據自己的後續實驗需要，選擇能製備低內毒素產品的廠家。
大家在重組蛋白表達純化過程中還遇到過什麼難題呢？
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