基因敲除穩轉株-點突變

2020-11-30 騰訊網

通過核轉染法將gRNA載體（含Cas9）和Donor共轉入細胞中，gRNA和Cas9複合物造成靶位點DNA雙鏈斷裂後，細胞以外源攜帶目標點突變的Donor作為模板進行同源重組修復（HDR），將目標點突變重組到基因組靶位點。

gRNA載體攜帶抗性，可進行藥篩，藥篩完成後挑選單克隆培養。選擇不同的克隆分別進行靶位點擴增及測序，篩選出點突變純合的陽性克隆。

點突變方案：

服務流程及質量控制

應用案例

PSEN1基因A79V突變可引起阿爾茨海默症。研究表明，將阿爾茨海默症患者的體細胞誘導為多能幹細胞（iPSC），然後通過用野生型序列替換點突變序列，修正突變的基因。通過研究患者的iPSC和修正後的iPSC，可以得知該突變對細胞表型的影響，從而深入研究該突變的病理性作用。

iPSC中PSEN1基因的序列分析

A_點突變修正後的雜合子測序結果。

B_ 點突變修正後的純合子測序結果（T>C）

Reference：

Fukuda, N., Senga, Y., & Honda, S.(2019). Anxa2‐and Ctsd‐knockout CHO cell lines to diminish the risk of

contamination with host cell proteins. Biotechnology progress, e2820.

來源 | 源井生物

註明 | 文章是源井生物原創，轉載請註明。

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