基因編輯是一種遺傳工程技術，針對某個序列已知但功能未知的序列，通過改變生物的
遺傳基因，使其特定的基因功能喪失作用，通過研究對生物體造成的影響，進而推測出該基因的生物學功能。本文為你科普基因編輯三大技術：
基因敲除
進行DNA水平編輯。一般用於構建基因敲除鼠模型。
CRISPR/Cas9系統作為細菌和古
細菌的獲得性免疫系統，通過RNA介導特異性的切割外源
遺傳物質，用以對抗入侵的病毒和質粒。使用Cas9切口酶和一對sgRNA，兩個相近的切口造成DNA雙鏈斷裂，誘導細胞發生非同源末端連接修復，造成目的基因的突變。
CRISPR/Cas9技術自問世以來，取代「鋅指核酸內切酶（ZFN）」、「類轉錄激活因子效應物核酸酶（TALEN），成為科研、醫療等領域的有效工具」.一般通過體外轉錄得到sgRNA與cas9的mRNA，通過注射到原核期受精卵內，移植到假孕母鼠體內獲得基因編輯的小鼠進行基因功能研究。
構建方法：
確定待敲除基因的靶位點。
設計識別靶位點的識別的一對sgRNA。
構建可表達sgRNA的Cas9質粒。
體外轉錄sgRNA 和Cas9 RNA。
將sgRNA和Cas9 RNA直接注射入受精卵檢測sgRNA活性。
將有活性的sgRNA和Cas9 RNA直接注射入受精卵建立Founder。
將Founder自交得到F1代。
適用範圍：
製備敲除鼠，利用敲除鼠進行基因功能的研究；進行細胞水平敲除基因時，可以選擇慢病毒
載體，構建lenticrispr-v2質粒，通過包裝病毒進行細胞水平敲除。
基因敲減
RNA水平，是指通過降解具有同源序列靶基因的mRNA，達到阻止基因表達的作用。一般用於細胞水平敲減基因。
（1）RNA幹擾：
是
siRNA雙鏈結合一個核酶複合物從而形成所謂RNA誘導沉默複合物RISC。激活的RISC通過鹼基配對定位到同源mRNA轉錄本上，並在距離siRNA3』端12個鹼基的位置切割mRNA，該mRNA發生降解而導致基因表達沉默，是一種特異性的轉錄後基因沉默。
一般合成針對靶基因的siRNA，通過轉染的方法使之進入細胞內，使靶基因沉默。這一方法受轉染效率的影響較大。目前有不少基因的siRNA已經有商業產品，所以使用時買來就可以了，比較方便。
適用範圍：
一般通過公司合成後，通過轉染細胞進行細胞水平敲減。
（2）shRNA：
「短髮夾RNA」，shRNA包括兩個短反向重複序列，中間由一莖環（loop）序列分隔的，組成髮夾結構，由polⅢ啟動子控制。隨後再連上5-6個T作為RNA聚合酶Ⅲ的轉錄終止子。
構建shRNA的病毒表達
載體，常用的病毒
載體有腺病毒載體、腺相關病毒載體、慢病毒載體等，機制與質粒載體相似，利用了病毒感染細胞效率比較高的特點，解決了用質粒載體轉染效率低的缺陷。
構建方法：
shRNA設計：設計RNA幹擾序列是RNAi實驗的關鍵。
載體構建：可根據實驗需求選擇慢病毒、腺病毒載體。
轉染細胞：常用的方法包括磷酸鈣轉染、脂質體轉染、電穿孔轉染等
觀測GFP 螢光和穩定表達細胞系篩選：可用於帶有GFP標籤的質粒載體。
檢測RNA 幹擾效率：可以在蛋白水平或mRNA水平檢測RNA幹擾效率。
適用範圍：
一般通過構建慢病毒、腺病毒等進行細胞水平敲減。
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2017（第四屆）基因編輯與臨床應用研討會
會議時間：2017.6.9 -6.10 會議地點：上海
會議詳情： http://meeting.bioon.com/2017geneediting/