AbMole精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：酯蟾毒配基 (RB)通過抑制GPX4介導鐵死亡和ROS生成，抑制結直腸癌細胞的生長和腫瘤發生
酯蟾毒配基(RB)已被用於癌症治療，但其潛在機制尚不明晰。本研究旨在研究RB治療對結直腸癌(CRC)細胞的影響，並探討其作用機制。
具體來說，研究人員採用細胞計數kit-8 (CCK-8)法測定細胞活力；通過光學顯微鏡觀察細胞形態，採用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(TUNEL)檢測細胞凋亡。細胞內亞鐵(Fe2+)、丙二醛(MDA)、穀胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平分別採用商業化的鐵定量試劑盒、MDA測定試劑盒、GSH測定試劑盒和2,7 -二氯二氫螢光素二乙酸(DCFH-DA)探針檢測。免疫印跡法和免疫組化法則用於測定蛋白表達。
從實驗結果可知，RB以劑量和時間依賴的方式抑制CRC細胞系(HT29和SW480)的細胞活力，並在高劑量下對正常結腸上皮細胞系(NCM460)產生細胞毒性。RB同樣可以誘導CRC細胞的形態學改變，由正常變為圓形，促進細胞死亡。值得注意的是，RB在CRC細胞中引發氧化應激和細胞鐵中毒死亡。只有鐵死亡抑制劑(DFO和鐵抑素-1)，而非其他類型細胞死亡(凋亡、自噬和壞死)的抑制劑，才能夠逆轉RB對CRC細胞增殖的抑制作用。此外，RB處理後穀胱甘肽過氧化物酶4 (GPX4)失活，過表達的GPX4抑制了RB誘導的CRC細胞氧化死亡。體內實驗證實RB也觸發氧化應激，並在微分子上抑制CRC細胞生長和致瘤性。研究人員最終得出結論:RB通過GPX4失活依賴的方式觸發鐵致凋亡，抑制CRC細胞生長和腫瘤發生。
CCK-8試劑盒 (Abmole, M4839) 為MTT 法的替代方法，是一種基於WST(水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用於細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
作者在研究過程中，研究並驗證了RB以劑量和時間依賴的方式抑制CRC細胞(HT29和SW480)和正常結腸上皮細胞(NCM460)的增殖。該實驗中，將上述細胞分別暴露於不同濃度(0、5、10和20μM)的RB中24 h和48 h。此後，採用CCK-8法測定細胞存活率。CCK-8即購自Abmole,在研究中發揮了重要的作用
鳴謝：Resibufogenin inhibited colorectal cancer cell growth and tumorigenesis through triggering ferroptosis and ROS production mediated by GPX4 inactivation[J]. The Anatomical Record, 2020.