這些內參or標籤抗體的意義是什麼？

2020-10-30 每日生物評論

三大內參：

beta Actin，肌動蛋白，細胞骨架蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恆定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。beta Actin 作為內參是得到公認的，針對大多數組織和細胞來說的，它廣泛分布於細胞質內，表達量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細胞內，beta Actin 的表達量就很少。

GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶，該酶是糖酵解反應中的一個酶，幾乎在所有組織細胞中都高水平表達，在同種細胞或組織中的表達量一般是恆定的，且很少受外部誘導物的影響。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，會增加 GAPDH 在特定細胞和組織中的表達。

beta Tubulin，微管蛋白，細胞骨架蛋白。【β-Tubulin小鼠單克隆抗體(3G6)，#A01030】 作為內參抗體，beta Tubulin 表達通常不會發生改變，因此被廣泛用於 Western Blot 內參，也常被用於免疫染色觀察細胞的微管結構。

標籤抗體：

Flag抗體-抗Flag標籤抗體

融合標籤，如Flag、GST等標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標籤包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標籤系統利用一個短的親水性八胺基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標蛋白。

His抗體-抗His標籤抗體

融合標籤根據其相對分子質量大小可以分為兩大類：大的蛋白質分子和小的多肽片段。融合標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。

GST抗體-抗GST標籤抗體

隨著越來越多的新基因的發現，基因融合蛋白表達體系以其在新發現蛋白研究中的顯著優勢已得到廣泛應用。其中GST標籤體系具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利於GST抗體製備等特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解，從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個非常好的強免疫原，因此，很容易製備抗新蛋白的抗體。正是由於以上的優點，商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標籤抗體系統至今仍被廣泛應用。

GFP抗體-抗GFP標籤抗體

常用的標籤包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中綠色螢光蛋白（Green Fluorescent Protein），簡稱GFP，這種蛋白質zui早是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長範圍的光線激發下，會發出綠色螢光。

Myc抗體-抗Myc標籤抗體

隨著蛋白質組學的迅猛發展，重組蛋白質的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標籤如GST、Myc、His等，可用於輔助目標蛋白的純化，這已經被廣泛使用。利用融合蛋白有助於重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。在1985年開發出鼠抗c-myc標籤抗體並被作為免疫化學試劑用於細胞生物學和蛋白質工程領域中。Myc標籤（序列為：EQKLISEEDL）已成功應用於WB雜交技術、免疫沉澱IP和流式細胞術中。因此可用於檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。

HA抗體-抗HA標籤抗體

融合標籤，如HA、His等標籤的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標籤包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標籤系統利用一個HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。

文章來源：每日生物評論

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