摘 要：目的 研究芹菜素（Api）和丹參酮ⅡA（Tan ⅡA）聯用對多種腫瘤細胞的協同抗腫瘤作用，並揭示其發生協同作用的機制。方法 以人胃癌BGC823細胞、人乳腺癌MCF7細胞、人肝癌SMMC7721細胞為研究對象，採用MTT法檢測Api和TanⅡA聯用對細胞的增殖抑制作用；採用AV-PI雙染法、PI染色法檢測藥物對BGC823細胞凋亡、細胞周期的影響；免疫印跡法檢測BGC823細胞凋亡相關蛋白p53、BAX/BCL-2和周期蛋白B1、D1的表達；圓二色和DNA熔點法檢測藥物與DNA結合情況；S180荷瘤鼠模型檢測藥物的抑瘤效果。結果 Api與Tan ⅡA聯用對BGC823等腫瘤細胞的增殖有協同抑制作用，聯用指數CI在0.28左右。兩藥聯用顯著增加了細胞凋亡（P＜0.01），上調了胞內BAX/BCL-2比值（P＜0.01）；周期蛋白水平發生變化，細胞周期阻滯在S期得到強化。兩藥與DNA以兩種不同方式結合，DNA熱變性曲線顯著改變。體內抑瘤實驗證明與單藥相比，兩藥聯用荷瘤鼠腫瘤體積和腫瘤質量均顯著降低（P＜0.01），抑瘤效果與環磷醯胺相當，但不良反應較小。結論 Api與TanⅡA聯用具有協同抗腫瘤作用；藥物與DNA以不同的方式結合，加劇了細胞周期的阻滯，是二者產生協同作用的核心機制。
近年來，腫瘤已經成為威脅人類生存健康的重大疾病。目前主要的治療手段由於靶點單一、耐藥性、不良反應大等原因無法根治腫瘤，手術、放療、化療後腫瘤易二次復發並擴散，臨床上需要一種低毒、多靶點的長期輔助藥物，用於手術、放化療後預防腫瘤的二次復發[1]。隨著植物化學研究的發展，人們發現了大量具有抗腫瘤活性的天然化合物，這些化合物毒性較低，不易產生耐藥性，但由於抗腫瘤效果和成藥性等問題，其臨床開發受到限制。具有抗腫瘤活性的天然化合物聯用，可同時作用於腫瘤細胞的多個靶點，並且具有協同抗腫瘤作用，是一種較好的給藥策略[2]。近年來，多藥聯合應用及其協同作用的研究越來越受到人們的重視[3]。
芹菜素（Api，圖1-A）是廣泛存在於蔬菜和水果中的一種黃酮類化合物，具有抗癌、抗氧化、抗炎、抗菌等多種生理功能[4]。Api對多種腫瘤細胞如抗膠質瘤[5]、前列腺癌[6]、胰腺癌細胞[7]、結腸癌[8]、乳腺癌[9]、卵巢癌[10]、宮頸癌[11]、肝癌[12]、肺癌細胞[13]具有抑制或促凋亡作用，其抗腫瘤的機制研究主要涉及的靶點有ROS[6,14-15]、p53[6,16-17]、AKT[18-19]、微管蛋白[5]、DNA[20]、Hsp90/Cdc37[4]等。
丹參酮ⅡA（Tan ⅡA，圖1-B）是一種在臨床上用來治療心血管疾病的天然化合物[21-22]，對多種癌細胞如乳腺癌細胞[23-24]、前列腺癌細胞[25]、結腸癌細胞[26]、肝癌細胞[27-28]、肺癌細胞[29]等具有抑制作用。Tan ⅡA是一種多靶點的單體化合物，其主要靶點包括VEGF/VEGFR2[29]、Bax/Bcl-2[30]、NF-κB[31]和p53[32]等。研究表明，Tan ⅡA為DNA的小溝結合劑，通過與DNA的小溝結合，可有效激活p53，進而誘發細胞凋亡[32]。與化療藥物相比，Tan ⅡA不良反應小、安全性高[31]，但其溶解性不佳、抗腫瘤作用不強，無法在臨床上用於抗腫瘤的治療[28]。
課題組前期研究發現，Api與Tan ⅡA聯用對腫瘤細胞具有協同抑制作用。本研究揭示了Tan ⅡA和Api在分子、細胞和動物水平上的協同抗腫瘤作用及作用機制。
1 儀器與材料
1.1 細胞株
人胃癌BGC823細胞、人乳腺癌MCF7細胞和人肝癌SMMC7721細胞由本課題組保存。
1.2 實驗動物
CL級BALB/c小鼠30隻，雌雄各半，6周齡，18～22 g，購自廣州中山大學實驗動物中心，動物合格證號SCXK（粵）2016-0029。
1.3 儀器
細胞培養箱、多功能酶標儀（Thermo公司）；倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；流式細胞儀（美國Becton Dickinson公司）；圓二色譜分析儀（日本Jasco公司）；垂直層流潔淨工作檯（西班牙Telstar公司）。
1.4 藥物與試劑
Tan ⅡA（批號150814）、Api（批號151205），質量分數均≥98%，購自四川維克奇生物技術有限公司；紫杉醇（批號NF-20160525，質量分數≥99%），購自西安天豐生物科技有限公司；環磷醯胺（CTX，批號SJ0121RA14，質量分數≥97%），購自上海源葉生物科技有限公司。
DMEM高糖培養基、胎牛血清，購自美國Hyclone公司；MTT、細胞凋亡檢測試劑盒，購自於南京凱基生物科技公司；BAX、BCL2、p53、周期蛋白B1、周期蛋白D1、GAPDH抗體，購自武漢三鷹生物技術有限公司；小牛胸腺DNA（CT-DNA）購自北京索萊寶有限公司。
2 方法
2.1 細胞培養
BGC823、MCF7、SMMC7721細胞分別用含10%胎牛血清的DMEM培養基，於5% CO2、37 ℃培養箱中培養。以1∶3傳代比，3～4 d傳代1次，傳代1～2次後即可用於後續實驗。
2.2 MTT法測定細胞增殖
以1×104/孔的密度分別將BGC823、MCF7、SMMC7721細胞接種於96孔板中，孵育24 h後分別加入Tan ⅡA（12.5、25、50、100、200 μmol/L）、Api（6.25、12.5、25、50、100 μmol/L）、紫杉醇（30 nmol/L），孵育48 h後棄去培養基，PBS洗滌1次，再加入100 μL含0.5 mg/mL MTT的無血清培養基孵育4 h，棄上清，加入100 μL DMSO，充分溶解後用酶標儀進行檢測，檢測波長570 nm，參考波長630 nm。
2.3 藥物協同指數確定
利用Chou-Talalay模型，可以計算出2種藥物共同作用的聯用指數CI[33]。當CI值＞1時，2種化合物具有拮抗作用；當CI值＝1時，2種化合物具有相加作用；當CI值＜1時，2種化合物具有協同作用，當CI值＜0.7時，2種化合物具有較強的協同效應。
CI＝D1/(Dx)1＋D2/(Dx)2
其中D1和D2分別代表聯合給藥時Tan ⅡA和Api的給藥濃度；(Dx)1和(Dx)2代表Tan ⅡA和Api達到聯合用藥抑制率時單獨給藥的濃度。
Dx＝Dm(fa/fu)1/m
其中fa和fu為兩藥聯用時的抑制率和存活率。fa＝1－fu；Dm是中位劑量（根據IC50理論計算）。對中效方程式兩邊取對數得到。
lg(fa/fu)＝mlgD－mlgDm
2.4 細胞凋亡檢測
採用Annexin V-FITC凋亡試劑盒測定Tan ⅡA和Api對BGC823細胞的促凋亡作用。BGC823細胞以5×105/孔的密度接種於6 cm培養皿中，孵育24 h。分別加入Tan ⅡA（50 μmol/L）、Api（100 μmol/L），孵育48 h後收集細胞，用PBS洗滌2次，加入100 μL含2 μL AnnexinV-FITC的結合液，於冰上避光孵育10min，流式細胞儀進樣檢測。
2.5 細胞周期檢測
用無血清的DMEM高糖培養基將BGC823細胞以5×105/孔的密度接種於6 cm的平皿中，孵育18～24 h後，棄去培養基，分別加入用10% FBS培養基配製的Tan ⅡA（50 μmol/L）、Api（100 μmol/L），孵育24、48、72 h後，1 200 r/min離心5 min，收集細胞。用PBS洗滌2次，加入200 μL預冷的PBS重懸，逐滴加入2 mL預冷的75%乙醇中，於4 ℃固定24 h；1 000 r/min離心5 min，收集細胞，PBS洗滌1次，加入200 μL PI染色液（50 μg/mL PI、200 μg/mL RNase A、0.1% TritonX-100），室溫避光染色30 min，經300目尼龍網濾過，流式細胞儀進樣檢測。
2.6 DNA結合分析
採用圓二色（CD）法測定藥物與DNA的結合情況。分別在CT-DNA中加入Tan ⅡA（25、50、100 μmol/L）、Api（50、100、200 μmol/L），以CT-DNA（100 μmol/L）溶液作為對照，比較藥物引起的DNA特徵CD譜圖的變化。採用J-810圓二色譜儀掃描得到CD圖譜，使用前用乾燥的N2將光譜儀光學室的O2排淨，使用光程為1 cm的石英皿以500 nm/min掃描235～400 nm的CD光譜，響應時間為0.5 s，狹縫寬度為2 nm，掃描累計2次後自動計算平均值。
2.7 DNA熔點分析
分別在CT-DNA中分別加入Tan ⅡA（25、50、100 μmol/L）、Api（50、100、200 μmol/L），以CT-DNA（100 μmol/L）溶液作為對照，比較藥物引起的DNA熔點變化。樣品從25 ℃升溫至95 ℃，採用紫外分光光度儀檢測樣品在260 nm的紫外吸收值。紫外吸收值對溫度作圖得到DNA熱變性曲線。實驗重複3次，結果取3次實驗的平均值。
2.8 免疫印跡法檢測BCL2、BAX、p53、周期蛋白B1、周期蛋白D1的表達
BGC823細胞，分別加入Tan ⅡA（25、50 μmol/L）、Api（50、100 μmol/L），孵育48 h，收集細胞。用細胞裂解蛋白提取試劑盒提取細胞總蛋白，用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。蛋白樣品（100～120 μg）經12% SDS-PAGE電泳後，電轉至PVDF膜，用含5%脫脂奶粉的TBST緩衝液（20 mmol/LTris-HCl、120 mmol/LNaCl、0.1%聚山梨酯20）37 ℃，封閉1～2 h。加入一抗於4 ℃孵育過夜，TBST緩衝液洗滌3次，再加入二抗，室溫孵育1 h，TBST緩衝液洗滌4次。加入ECL發光液顯影，用Gel-Pro分析軟體分析目標蛋白的灰度值。
2.9 S180腫瘤模型抑瘤分析
小鼠ip 0.2 mL S180細胞，5～9 d後，在超淨工作檯內抽出腫瘤細胞，加入適量PBS，離心棄上清液，加入3倍體積的PBS重懸。將0.2 mL細胞液注射到小鼠右腋下。繼續飼養小鼠3～4 d，小鼠右腋有明顯硬塊則表明腫瘤細胞已在小鼠右腋下生長，篩選出右腋有明顯硬塊的小鼠用於實驗。
根據前期實驗探索，造模成功的小鼠分為對照組、Tan ⅡA（30 mg/kg）組、Api（60 mg/kg）組、Tan ⅡA與Api聯用組、CTX（20 mg/kg）組，每組6隻。Tan ⅡA、Api分別以25%大豆油水混合物超聲溶解，CTX以超純水溶解。各給藥組小鼠ig 0.5 mL相應藥物，1次/d，連續10 d。每天記錄各組小鼠體質量。10 d後，稱定小鼠體質量後處死，取出腫瘤稱定質量並用遊標卡尺測量腫瘤大小。測量腫瘤的長和寬，取平均值作為腫瘤的直徑。
腫瘤體積＝(瘤長×瘤寬2)/2
腫瘤抑制率＝1－藥物組腫瘤質量/對照組腫瘤質量
2.10 統計學分析
各實驗組均以表示，顯著性分析用SPSS 16.0軟體中的ANOVA的單因素方差分析。
3 結果
3.1 Tan ⅡA與Api對細胞增殖的影響
如圖2-A所示，Tan ⅡA和Api對BGC823細胞的毒性呈劑量相關性增加。給予Api（200 μmol/L），細胞存活率為（45.0±8.9）%；給予Tan ⅡA（100 μmol/L），細胞存活率為（46.5±8.7）%；Tan ⅡA（100 μmol/L）和Api（200 μmol/L）聯用，細胞存活率為（10.6±1.6）%。Api（25 μmol/L）與Tan ⅡA（12.5 μmol/L）聯用對細胞的毒性與紫杉醇相當。Api、Tan ⅡA的IC50分別為190、102 μmol/L；聯用時，Api、Tan ⅡA的IC50分別為25、12.5 μmol/L；聯用後，Api、Tan ⅡA的抗腫瘤活性均提高了8倍。如圖2-B所示，Api（25 μmol/L）與Tan ⅡA（12.5 μmol/L）的CI值為0.28。
如圖3所示，Tan ⅡA、Api對MCF7細胞的毒性呈劑量相關性增加。給予Api（50 μmol/L），細胞存活率為（72.0±5.1）%；給予Tan ⅡA（25 μmol/L），細胞存活率為（39.8±8.4）%；Tan ⅡA（50 μmol/L）和Api（25μmol/L）聯用，細胞存活率下降到（14.1±3.2）%。Tan ⅡA（50 μmol/L）和Api（12.5 μmol/L）對細胞的毒性與紫杉醇相當。Tan ⅡA（50 μmol/L）和Api（25 μmol/L）聯用的CI值為0.31。
如圖4所示，Tan ⅡA、Api對SMMC7721細胞的毒性呈劑量相關性增加。給予Api（50 μmol/L），細胞存活率為（86.2±2.3）%；給予Tan ⅡA（25 μmol/L），細胞存活率為（68.5±6.1）%；Tan ⅡA（50 μmol/L）和Api（25 μmol/L）聯用，細胞存活率下降到（27.0±2.6）%。Tan ⅡA（12.5 μmol/L）和Api（25 μmol/L）聯用對細胞的毒性與紫杉醇相當。Tan ⅡA（25 μmol/L）和Api（50 μmol/L）的CI值為0.25。
上述結果表明，Tan ⅡA和Api聯用對多種腫瘤細胞具有協同抗腫瘤作用。由於Tan ⅡA和Api對3種細胞協同抗腫瘤的效果差異不大，後續研究採用BG823細胞株為對象。
3.2 Tan ⅡA與Api對BGC823細胞凋亡的影響
如圖5所示，Tan ⅡA和Api聯用時，細胞早期凋亡率（Q4）為39.0%，高於TanⅡA組（14.7%）和Api組（29.8%）；晚期凋亡與早期凋亡率之和（Q2＋Q4）為65.4%，高於Tan ⅡA組（27.6%）和Api組（41.9%）。表明與單獨給藥相比，TanⅡA和Api聯用更能促進BGC823細胞凋亡。
如圖6-A、B所示，與對照組比較，TanⅡA、Api均顯著下調細胞中抗凋亡蛋白BCL2表達，上調促凋亡蛋白BAX的表達（P＜0.01）；與單獨給藥組比較，聯用組BCL2蛋白表達顯著降低，BAX蛋白表達顯著升高（P＜0.01）。BCL2/BAX是啟動細胞凋亡的「分子開關」，BCL2/BAX降低促進細胞凋亡，升高則細胞凋亡耐受。Tan ⅡA和Api聯用時，BCL2表達降低，BAX表達升高，促進細胞凋亡。
促凋亡蛋白p53是BAX和BCL2的上遊調控蛋白，如圖6-C所示，與對照組比較，Tan ⅡA、Api均顯著升高細胞中p53表達（P＜0.01）；與單獨給藥組比較，聯用組p53蛋白表達顯著升高（P＜0.01）。
以上結果表明，Tan ⅡA和Api存在協同抗腫瘤的作用，且與p53信號通路相關。
3.3 Tan ⅡA與Api對BGC823細胞周期的影響
如圖7所示，給予Tan ⅡA 24 h時，與對照組（54.17%）相比，G1期細胞佔比為52.77%，48 h時增加至57.14%，72 h時增加至60.72%；24 h時，與對照組（9.15%）相比，G2/M期細胞佔比為8.40%，48 h時明顯下降至2.90%，72 h時未檢測到G2/M期細胞；24、48、72 h時，S期細胞佔比為38.83%～39.95%，與對照組（36.67%）相比沒有顯著變化。上述結果說明Tan ⅡA將細胞周期阻滯在G1期。
與Tan ⅡA不同，給予Api 24 h時，與對照組（54.17%）比較，G1期細胞佔比降至41.22%，48 h上升至47.19%，72 h時降至38.47%；24 h時，與對照組（9.15%）比較，G2/M期細胞佔比上升至21.41%，48 h時為20.24%，72 h時上升至53.71%；24 h時，S期細胞佔比為37.38%，48 h時降至32.57%，72 h時降至7.82%。上述結果表明Api將細胞周期阻滯在G2/M期。
Tan ⅡA與Api聯用時，周期阻滯更加複雜。24 h時，G1期細胞佔比從54.17%降至49.56%，S期細胞佔比從36.67%降至23.57%，G2/M期細胞從9.15%增加至26.78%，說明細胞發生了G2/M期阻滯。48 h時，G1期細胞佔比從49.56%增加至69.58%，S期細胞佔比從23.57%降低至2.87%，G2/M期細胞26.78%上升至27.54%，說明細胞在G2/M期的基礎上還發生了G1期阻滯。72 h時，G1期細胞佔比從69.58%降低至36.73%，S期細胞佔比從2.87%增加至58.14%，G2/M期細胞從27.54%降低至5.13%，說明細胞發生了S期阻滯。
綜上，Tan ⅡA將細胞周期阻滯在G1期；Api將細胞周期阻滯在G2/M期；Tan ⅡA與Api聯用時，細胞發生多個檢查點的周期阻滯，24 h先阻滯於G2/M期，48 h阻滯於G1期和G2/M期，72 h阻滯於S期。
細胞的細胞周期受到嚴格的調控，當細胞周期阻滯時，周期蛋白水平發生改變。Cyclin B1參與調控細胞周期從G2期向M期過渡，細胞進入M期後，Cyclin B1水平減少，因此當周期阻滯於G2/M期，Cyclin B1水平增加。Cyclin D1參與調控細胞周期從G1期向S期過渡，細胞進入S期後，Cyclin D1水平減少，因此當周期阻滯在G1期，CyclinD1水平增加。如圖8所示，Api單獨給藥後，細胞內Cyclin B1蛋白表達顯著增加（P＜0.01），提示細胞發生G2/M期阻滯。Tan ⅡA單獨給藥後，細胞內CyclinD1蛋白表達顯著增加（P＜0.01），提示細胞阻滯在G1期。Tan ⅡA與Api聯用48 h後，與單獨給藥組相比，細胞內Cyclin B1蛋白表達顯著增加，Cyclin D1蛋白表達顯著減少（P＜0.01），提示此時發生了多個檢查點的周期阻滯，細胞處於G2期和S期阻滯。
3.4 Tan ⅡA、Api與DNA的相互作用
p53是DNA損傷的響應元件，為了進一步探討Tan ⅡA與Api的協同機制，採用CD光譜法和DNA熔點檢測來考察Tan ⅡA、Api與DNA的相互作用。
如圖9-A所示，無藥物處理時，CT-DNA呈現典型的B型DNA圖譜；Api與DNA孵育後，在300～400 nm產生了誘導圓二色（ICD）信號，且信號隨Api劑量增加而增強，說明Api與CT-DNA之間產生了相互作用。通常較強的ICD信號表示產生了外部的結合模式（溝槽結合或外部堆積），較弱的ICD信號表示對應嵌入結合模式，嵌插劑的發色團分子長軸與DNA鹼基對長軸垂直時產生正的ICD信號，而嵌插劑發色團分子長軸與DNA鹼基對長軸平行時產生負的ICD信號。
因此，結果表明，隨Api劑量增加，Api與DNA產生了溝槽結合和外部堆積。如圖9-B所示，Tan ⅡA與CT-DNA孵育後，在276 nm處信號增強。說明Tan ⅡA與DNA結合，改變了DNA骨架的鹼基堆積結構。如圖9-C所示，當Tan ⅡA、Api與DNA同時孵育時，兩種CD信號同時顯現，說明同時發生了兩種不同方式的結合。兩種藥物聯用時，在300～400 nm ICD信號由正轉負，提示可能產生了DNA嵌入。
如圖10所示，Tan ⅡA、Api與DNA結合後熱變性曲線發生了明顯的變化。Api與CT-DNA結合後熱變性曲線上移，Tan ⅡA與CT-DNA結合後，熱變性曲線下移，Tan ⅡA、Api混合物與CT-DNA結合後，熱變性曲線顯著下移，說明Tan ⅡA、Api同時與DNA結合後，對DNA的穩定性產生了更大的改變。
3.5 Tan ⅡA與Api對荷瘤鼠的作用
如圖11-A所示，與對照組比較，CTX組小鼠體質量顯著降低（P＜0.01），Tan ⅡA、Api單獨給藥和聯合給藥組小鼠體質量均無顯著變化，表明Tan ⅡA與Api對小鼠的毒性較低。
如圖11-B～D、表1所示，Tan ⅡA、Api組腫瘤質量為（1.93±0.35）、（2.22±0.47）g，與對照組（2.17±0.24）g相比無顯著變化；Tan ⅡA與Api聯組腫瘤質量為（1.35±0.12）g，與對照組相比顯著降低（P＜0.01），抑瘤效果優於CTX組（1.79±0.28）g。說明Tan ⅡA與Api在小鼠體內可以發揮協同抗腫瘤作用。
4 討論
遺傳物質DNA是抗腫瘤藥物作用的重要靶點。DNA結合劑可以幹擾DNA與蛋白之間的相互作用，並影響DNA複製、轉錄、翻譯、修復等一系列生物過程。DNA結合劑主要包括小溝結合劑、大溝結合劑和DNA嵌入劑[34]。
本研究發現Tan ⅡA與Api都能夠與CT-DNA發生相互作用，但作用的方式不同，Tan ⅡA改變了CT-DNA的鹼基堆積，但沒有改變螺旋的結構；Api以外部結合的方式與CT-DNA結合。Tan ⅡA與Api聯用，改變CT-DNA的鹼基堆積及外部溝槽結合堆積兩種結合同時發生。Tan ⅡA和Api都能夠影響CT-DNA的熱變性曲線，兩者聯合使CT-DNA的熱變性曲線顯著下移。表明Tan ⅡA嵌入DNA雙螺旋的結構中，改變了雙螺旋的鹼基堆積；Api以相對較弱的作用力在外部與DNA雙螺旋結合；這兩種作用力同時出現，改變了DNA的穩定性，影響DNA複製、轉錄、翻譯、修復等。
細胞周期結果顯示，Tan ⅡA將細胞阻滯在G1、S期，Api將細胞阻滯在G2/M期；兩種藥物聯用使細胞周期的阻滯增強，多個細胞檢查點上發生周期阻滯。24～72 h，細胞先後發生G2/M期阻滯、G1期和G2/M期阻滯、S期阻滯。因此，由於Tan ⅡA、Api與DNA結合，幹擾DNA的轉錄、複製等，使細胞無法增殖，從而誘導腫瘤細胞凋亡。
本研究發現Tan ⅡA和Api聯用對BGC823、MCF7、SMMC7721細胞都具有顯著的協同抗腫瘤作用，並且Api（25 μmol/L）與TanⅡA（12.5 μmol/L）聯用的細胞毒性與紫杉醇（30 nmol/L）相當。S180荷瘤鼠的抑瘤實驗證實了Tan ⅡA與Api的協同抗腫瘤作用，與CTX相比，抑瘤效果更優、不良反應更小。
腫瘤是典型的內生性疾病，致病基因和靶點複雜。單一靶點的化學藥物，很難解決問題，並且腫瘤細胞的變異也會造成耐藥性問題。因此，抗腫瘤藥物設計、篩選時，多靶點協同作用可解決藥物有效性、耐藥性、不良反應的問題。
Tan ⅡA與Api作為中草藥的有效活性成分，均具有一定的抗腫瘤作用，但因為抗腫瘤效果不強和成藥性等問題無法應用於臨床。本研究利用Tan ⅡA與Api的協同作用機制，通過聯合給藥增強了抗腫瘤的功效，降低了不良反應，為開發低毒、高效的抗腫瘤輔助用藥提供理論支持，也為中藥現代化提供了方向。
參考文獻（略）
來 源： 李瑩雪，王銳銀，包永明．芹菜素與丹參酮ⅡA的協同抗腫瘤作用及機制 [J]. 中草藥, 2020, 51(22):5788-5797.