DNA抽提實驗是科研工作中經常用到的，比如基因模式小鼠的基因型鑑定需要抽提DNA，螢光素酶報告實驗等需要抽提質粒。目前市面上也不斷出現許多DNA抽提試劑盒，價格相對昂貴，抽提次數有時不適用於大規模樣品。或者偶爾進行一兩次實驗時，造成不必要的浪費。正如前段時間網上討論火熱的「2塊錢的Vc與200塊錢的Vc」，其補充成分或含量都是相近的。DNA抽提實驗也有許多簡單易行質量好的操作方法，今天為大家介紹兩種DNA抽提實驗的原理與方法。
一、鹼式裂解法：
常用於基因模式小鼠的基因型鑑定，優點是簡易快捷，經濟實惠。
1.實驗原理：
通過加入NaOH，使組織裂解，釋放DNA。
2.實驗方法：
1）小鼠出生7天左右時，剪區小鼠腳趾約 0.5 釐米，放入無菌的1.5ml EP管內，同時對小鼠進行編號；
2）加入200ul 50mmol NaOH，放入85℃水浴鍋中進行加熱50min，直至組織消化，肉眼可以絮狀物質；
3）加入20ul PH 8.0 Tris HCl終止反應，並進行充分的斡旋震蕩；
4）12000rpm離心5分鐘，取2ul上清液即可直接進行基因鑑定的PCR反應。
二：熱酚法提取樣品DNA
1.實驗原理：
苯酚、氯仿、異戊醇抽提DNA的原理是通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質，再加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。該方法可以獲得純度較高的DNA。其中：
（1）使用苯酚抽提細胞 DNA 時，苯酚的作用是使蛋白質變性，同時抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由於蛋白與 DNA 聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相，而 DNA 溶於水相。
（2）氯仿的作用是加速有機相與液相分層。最後用氯仿抽提：酚易溶於氯仿中，去除核酸溶液中的酚。
（3）用酚-氯仿抽提細胞基因組 DNA 時，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，因為異戊醇可以減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊醇有助於分相，使離心後的上層含 DNA 的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
（4）用乙醇沉澱DNA，加入單價陽離子，如NaAC，Na+可以和DNA分子上的負電荷，減少DNA分子間的同性電荷相斥力，易於聚集沉澱。
2.實驗方法：
（1）將組織加入50ul裂解液（裂解液內加入PK,10ng/ul,2ul），60度水浴消化過夜。
（2）12000rpm離心5分鐘，吸取上清液至新的EP管中。
（3）加入等量酚氯仿，上下輕輕顛倒混勻6-8次，12000rpm離心10分鐘。
（4）離心後可見液體分層，小心吸取上層液體到新的EP管中，加入2倍體積預冷的100%乙醇，再加入1/10體積3M NaAC，-20度靜置30分鐘。
（5）12000rpm離心10分鐘，棄掉上清液。
（6）加入70%乙醇，輕輕吹打，可見到DNA薄片，保證薄片在液體中，12000rpm離心10分鐘，棄上清液。
（7）將EP管放回離心機瞬時離心，儘量吸棄剩餘乙醇。
（8）開蓋靜置10分鐘，使多餘乙醇揮發。
（9）加入適量超純水，斡旋，測濃度。
附：裂解液配製方法
（1）100mMTris HCl: 維持細胞破裂後 PH穩定性。
（2）0.5M EDTA: 溶解細胞膜。
（3）20%SDS：去垢劑，溶解細胞膜。
（4）5M NaCL:維持一定離子濃度和滲透壓。
好了，今天就介紹到這裡，以上兩種DNA抽提方法你學會了嗎？