配製sds-page凝膠需要注意凝膠製備的過程很簡單,但是凝膠一定要均勻無氣泡,取出梳子的時候一定要小心,放置將膠孔戳破。
SDS-PAGE凝膠的製備過程:
1、 按要求裝配好垂直電泳板,兩塊玻璃板的兩側及底部用1%的瓊脂糖封邊,防止封閉不嚴而使聚丙烯醯胺液漏出。
2、 將裝好的玻璃電泳板傾斜成45~60℃角。
3、 按配製所需%濃度凝膠的毫升數。
4、 加入TEMED後,立即混勻,緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中,直到液體接近溢出時為止。
5、 立即插入適當的梳子,密切注意防止梳齒下產生氣泡,用一有力的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上,然後將玻璃板斜靠在物體上,使成10°角,可減少液體洩漏的機會。
6、 室溫聚合一小時後,將玻璃板插入電泳槽中,上緊,倒入0.1XTBE緩衝液。
7、 小心取出梳子,加樣。