常見實驗用溶液的配製方法

　　1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺於足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存於-20℃。

　　1mol/L精胺(Spermine)：溶解3.48g精胺於足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存於-20℃。

　　10mol/L乙酸胺(ammonium acetate)：將77.1g乙酸胺溶解於水中，加水定容至1L後，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

　　10mg/ml牛血清蛋白(BSA)：加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學試劑級，無DNA酶)於9.5ml水中(為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白)，蓋好蓋後，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然後分裝成小份貯存於-20℃。

　　1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存於-20℃。或轉移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65ml的水配製成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

　　8mol/L乙酸鉀(potassium acetate)：溶解78.5g乙酸鉀於足量的水中，加水定容到100ml。

　　1mol/L氯化鉀(KCl)：溶解7.46g氯化鉀於足量的水中，加水定容到100ml。

　　3mol/L乙酸鈉(sodium acetate)：溶解40.8g的三水乙酸鈉於約90ml水中，用冰乙酸調溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

　　0.5mol/L EDTA:配製等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L)，混合後形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，並溶於水中，定容至1L。

　　1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶於約90ml的水中，用NaOH調pH(6.8-8.2)，然後用水定容至100ml。

　　1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

　　25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)於10ml水中，分成小份貯存於-20℃。

　　1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2?6H2O於足量的水中，定容到100ml。

　　100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF(苯甲基磺醯氟)於足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份並用鋁箔將裝液管包裹或貯存於-20℃。

　　20mg/ml蛋白酶K(proteinase K)：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然後分裝成小份貯存於-20℃。

　　10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase)：溶解10mg的胰蛋白RNA酶於1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解後於水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調pH至7.5，於-20℃貯存。(配製過程中要戴手套)

　　5mol/L氯化鈉(NaCl)：溶解29.2g氯化鈉於足量的水中，定容至100ml。

　　10N氫氧化鈉(NaOH)：溶解400g氫氧化鈉顆粒於約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌)，氫氧化鈉完全溶解後用水定容至1L。

　　10%SDS(十二烷基硫酸鈉)：稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

　　2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol)：溶解36.4g山梨(糖)醇於足量水中使終體積為100ml。

　　100%三氯乙酸(TCA):在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。(稀釋液應在臨用前配製)

　　2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)：溶解25mg的X-gal於1ml的二甲基甲醯胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管，貯存於-20℃。

　　100×Denhardt試劑(Denhardt’s regent)

　　成分及終濃度配製100ml溶液各成分的用量

　　2%聚蔗糖(Ficoll，400型)

　　2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)

　　2%BSA(組分V)

　　水2g

　　2g

　　2g

　　加水至總體積為100ml

　　依照上表稱取各組分，溶於水中定容。過濾除菌及雜質，分裝成小份於-20℃貯存。

　　10×標準DNA連接酶緩衝液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端連接)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分的用量

　　0.5mol/L Tris-HCl

　　100mmol/L MgCl2

　　100mmol/L DTT

　　2mmol/L ATP

　　5mmol/L 鹽酸亞精胺(可選)

　　0.5mg/ml BSA(組分V)(可選)

　　水5ml 1mol/L 貯液

　　1ml 1mol/L 貯液

　　1ml 1mol/L 貯液

　　200ul 100 mmol/L 貯液

　　50ul 1 mmol/L 貯液

　　0.5ml 10 mg/mL 貯液

　　2.25ml

　　將配製好的緩衝液分裝成小份，貯存於-20℃ 。

　　100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)

　　可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80℃可貯存至少6個月。

　　10mmol/L dNTP混合液

　　成分及終濃度配製20ul溶液各成分的用量

　　10mmol/L dATP

　　10mmol/L dCTP

　　10mmol/L dGTP

　　10mmol/L dTTP

　　水2ul 100 mmol/L dATP 貯液

　　2ul 100 mmol/L dCTP 貯液

　　2ul 100 mmol/L dGTP 貯液

　　2ul 100 mmol/L dTTP 貯液

　　12ul

　　20%PEG 8000/2.5M NaCl

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分的用量

　　質量濃度為20%聚乙二醇

　　2.5mol/L 氯化鈉

　　水20g

　　50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉

　　補足100ml

　　加聚乙二醇於含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。

　　20×SSC

　　成分及終濃度配製1L溶液各成分的用量

　　300mmol/L 檸檬酸三鈉(二水)

　　3mol/L 氯化鈉

　　水88.2g

　　175.3g

　　補足1L

　　溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉於約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調pH為7.0，用水補足體積至1L。

　　DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水

　　加100ul DEPC 於 100ml 水中，使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h，然後在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘餘的DEPC失活。DEPC會與胺起反應，不可用DEPC處理Tris緩衝液。

　　甲醯胺(deionized formamide)

　　直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂於裝有甲醯胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲醯胺中的離子。經Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂後分成小份，充氮氣於-80℃貯存(防止氧化)。

　　磷酸緩衝液(phosphate buffer)

　　按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單鹼)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙鹼)貯液，獲得所需pH的磷酸緩衝液。配製1 mol/L 的磷酸二氫鈉(NaH2PO4?H2O)貯液：溶解138g於足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g於足量水中使終體積為1L。

　　1mol/L 磷酸二氫鈉(ml)1mol/L 磷酸氫二鈉(ml)最終pH值

　　877

　　850

　　815

　　775

　　735

　　685

　　625

　　565

　　510

　　450

　　390

　　330

　　280123

　　150

　　185

　　225

　　265

　　315

　　375

　　435

　　490

　　550

　　610

　　670

　　7206.0

　　6.1

　　6.2

　　6.3

　　6.4

　　6.5

　　6.6

　　6.7

　　6.8

　　6.9

　　7.0

　　7.1

　　7.2

　　TE(用於懸浮和貯存DNA)

　　成分及終濃度配製100ml溶液各成分的用量

　　10mmol/L Tris-HCl

　　1mmol/L EDTA

　　水1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0，25℃)

　　200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)

　　98.8ml

　　Tris緩衝液(Tris-HCl buffer)

　　將121g的Tris鹼溶解於約0.9L水中，再根據所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N)，用水調整終體積至1L。

　　濃鹽酸的體積(ml)pH

　　8.6

　　14

　　21

　　28.5

　　38

　　46

　　56

　　66

　　71.3

　　769.0

　　8.8

　　8.6

　　8.4

　　8.2

　　8.0

　　7.8

　　7.6

　　7.4

　　7.2

　　二.電泳緩衝液、染料和凝膠加樣液 電泳緩衝液 50×Tris-乙酸(TAE)緩衝液

　　成分及終濃度配製1L溶液各成分的用量

　　2mol/L Tris鹼

　　1mol/L 乙酸

　　100 mmol/L EDTA

　　水242g

　　57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)

　　200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)

　　補足1L

　　5×Tris-硼酸(TBE)緩衝液

　　成分及終濃度配製1L溶液各成分的用量

　　445 mmol/L Tris鹼

　　445 mmol/L 硼酸鹽

　　10 mmol/L EDTA

　　水54g

　　27.5g 硼酸

　　20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)

　　補足1L

　　染料

　　1%溴酚藍(bromophenol blue)

　　加1g水溶性鈉型溴酚藍於100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

　　1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)

　　溶解1g二甲苯青FF於足量水中，定容到100ml。

　　10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide)

　　小心稱取1g溴化乙錠，轉移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，於4℃貯存。

　　凝膠上樣液(gel loading solutions)

　　6×鹼性凝膠上樣液(室溫貯存)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

　　0.3 N 氫氧化鈉

　　6 mmol/L EDTA

　　18%聚蔗糖(400型)

　　0.15%溴甲酚綠

　　0.25%二甲苯青FF

　　水300ul 10N 氫氧化鈉

　　120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

　　1.8g

　　15mg

　　25mg

　　補足到10ml

　　6×聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

　　0.15%溴酚藍

　　0.15%二甲苯青FF

　　5 mmol/L EDTA

　　15%聚蔗糖(400型)

　　水1.5ml 1%溴酚藍

　　1.5ml 1%二甲苯青FF

　　100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

　　1.5g

　　補足到10ml

　　6×溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

　　0.25%溴酚藍

　　0.25%二甲苯青FF

　　15%聚蔗糖(400型)

　　水2.5ml 1%溴酚藍

　　2.5ml 1%二甲苯青FF

　　1.5g

　　補足到10ml

　　6×甘油凝膠上樣液(4℃貯存)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

　　0.15%溴酚藍

　　0.15%二甲苯青FF

　　5 mmol/L EDTA

　　50%甘油

　　水1.5ml 1%溴酚藍

　　1.5ml 1%二甲苯青FF

　　100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

　　3ml

　　3.9ml

　　6×蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

　　0.15%溴酚藍

　　0.15%二甲苯青FF

　　5 mmol/L EDTA

　　40%聚蔗糖

　　水1.5ml 1%溴酚藍

　　1.5ml 1%二甲苯青FF

　　100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

　　4g

　　補足到10ml

　　10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)

　　成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

　　0.2%溴酚藍

　　0.2%二甲苯青FF

　　200 mmol/L EDTA

　　0.1%SDS

　　50%甘油

　　水20mg

　　20mg

　　4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

　　100ul 10% SDS

　　5ml

　　補足到10ml

　　三.常用培養基 LB培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

　　蛋白腖10g

　　酵母提取物5g

　　氯化鈉10g

　　如果需要用1N NaOH(～1ml)調整pH至7.0，再補足水至1L。註：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　　SOB培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

　　蛋白腖20g

　　酵母提取物5g

　　氯化鈉0.5g

　　1 mol/L 氯化鉀2.5ml

　　用水補足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養基冷卻到室溫後，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。

　　SOC培養基

　　成分、方法同SOB培養基的配製，只是在培養基冷卻到室溫後，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶於足夠水中，再用水補足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌)。

　　TB培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

　　蛋白腖12g

　　酵母提取物24g

　　甘油4ml

　　各組分溶解後高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。

　　2×YT培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

　　蛋白腖16g

　　酵母提取物10g

　　氯化鈉4ml

　　如果需要用1N NaOH(～1ml)調整pH至7.0，再補足水至1L。註：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　　YPD培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

　　蛋白腖20g

　　酵母提取物10g

　　葡萄糖20g

　　用水補足體積為1L後，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸營養缺陷型每升培養基添加1.6g色氨酸，因為YPD培養基是色氨酸限制型培養基。為了配製平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。

　　四.常用抗生素

　　氨苄青黴素(ampicillin)(100mg/ml)

　　溶解1g氨苄青黴素鈉鹽於足量的水中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加於生長培養基。

　　羧苄青黴素(carbenicillin)(50mg/ml)

　　溶解0.5g羧苄青黴素二鈉鹽於足量的水中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加於生長培養基。

　　甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

　　溶解1g甲氧西林鈉於足量的水中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨苄青黴素一起添加於生長培養基。

　　卡那黴素(kanamycin)(10mg/ml)

　　溶解100mg卡那黴素於足量的水中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加於生長培養基。

　　氯黴素(chloramphenicol)(25mg/ml)

　　溶解250mg氯黴素足量的無水乙醇中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加於生長培養基。

　　鏈黴素(streptomycin)(50mg/ml)

　　溶解0.5g鏈黴素硫酸鹽於足量的無水乙醇中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加於生長培養基。

　　萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

　　溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽於足量的水中，最後定容至10ml。分裝成小份於-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加於生長培養基。

　　四環素(tetracyyline)(10mg/ml)

　　溶解100mg四環素鹽酸鹽於足量的水中，或者將無鹼的四環素溶於無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，於-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加於生長培養基。