特殊染色方法及化學試劑的選擇

2021-01-14 病理染色技術

一、特殊染色方法的選擇:

因特殊染色方法具有多重選擇性:

1.一種染色方法可染不同物質:

PAS染色:真菌、糖原、黏液物質、脂褐素、腦垂體細胞等

 

PAS染色(真菌菌絲及中性黏液物質)應用的廣泛性

醛品紅染色:彈性纖維、黏液物質、脂褐素、B型肝炎病毒、肥大細胞等

 

醛品紅染色(B型肝炎病毒及肥大細胞)應用的廣泛性

甲苯胺藍染色:胃幽門螺桿菌、肥大細胞、尼氏體等

2.一種物質可用多種染色方法:

胃幽門螺桿菌:硝酸銀染色、鹼性品紅染色、硼酸亞甲藍染色、甲苯胺藍染色、吉姆薩染色等

 

胃幽門螺桿菌(鹼性品紅及吉姆薩染色)

彈性纖維:醛品紅染色、維多利亞藍染色、Weigert間苯二酚鹼性品紅染色、Verhoeff鐵蘇木精染色、地衣紅染色法等

黏液物質:AB-PAS染色法、黏液胭脂紅染色、AB(pH2.5)染色、Hale膠體鐵染色、HID-AB染色等

 

酸性黏液物質(AB-PAS及黏液胭脂紅染色)

所以,選擇一個好的染色法尤為重要。

特殊染色方法選擇應遵循:

1、特異性高、傳統或經典的染色方法

特異、傳統/經典的一些染色法在特殊染色方法的選擇中往往作為首選。

如顯示澱粉樣物質。剛果紅染色作為經典的方法,比天狼星紅、甲基紫等其他方法都要實用。

 

澱粉樣物質(剛果紅及天狼星紅染色)

2、染色流程相對簡便、染液易配製的染色方法

選擇染色流程簡便的方法,無論對於量較多的整批次染色,還是較少量的染色均能夠節省時間、更為便捷。選擇染液易配製的方法,對自配染液(尤其是保存較短的染液)是較為重要的選擇,不容易造成因染液配製問題而影響染色結果。

如顯示彈性纖維。醛品紅染色法無論是從染色流程,還是染液配製都要比鐵蘇木精、間苯二酚鹼性品紅等染色方法要簡單方便、省時,同時陽性著染對比度也很明顯。

 

彈性纖維(醛品紅及鐵蘇木精染色)

如顯示胃幽門螺桿菌。雖然硝酸銀染色著染的菌體對比度較好,但其所使用染液較多、染色步驟較為繁瑣耗時,工作中多使用其他方法(鹼性品紅法、硼酸亞甲藍法等)進行染色。

3、染色結果對比鮮明、結果易保存、陽性突出的染色方法

突出的陽性結果在於所選擇方法表達的色調及如何進行背景的復染。結果能夠長時間保存、不褪色對於後續的調閱、科研、論文均較為有利。

如顯示澱粉樣物質,甲基紫染色法雖然流程較為簡單,但結果不易保存,陽性對比度相對不突出;剛果紅染色法陽性結果明顯,長時間保存不褪色,流程簡便,更是實用的方法。

如顯示彈性纖維,地衣紅染色染液雖配製較方便,但結果對比度相對欠佳,與其他幾個染色法相比,多不選擇使用。

 

彈性纖維(維多利亞藍及地衣紅染色):

地衣紅染色染液配製、流程方法簡單,但陽性對比度不明顯。

4、兩種染色能夠相互印證一個物質的染色方法

在條件允許的情況下,對一些物質可使用兩種染色法來相互印證,更能提高結果的準確性。

如顯示澱粉樣物質,剛果紅染色後,經偏光顯微鏡確認則能進一步確認陽性結果。

如顯示膠原纖維,Van Gieson與Masson染色同時進行,則更能保證結果的準確性。

 

闊韌帶腫物—平滑肌瘤(VG及Masson染色相互驗證)

二、特殊染色化學試劑的選擇:

化學試劑的選擇主要針對自配試劑而言,對於商品化試劑盒則在於染液質量。

1、一般要求選用優質品牌的化學試劑,特別是一些染色中關鍵的試劑

優質的化學試劑(如Sigma、國藥、阿拉丁、西隴等)是保證高質量染液的前提和關鍵,特別對於染液中的關鍵試劑尤為重要。

如鹼性品紅在一些染色液(抗酸、無色品紅、醛品紅等)中均為主要試劑,其質量決定了最終的染色效果。

如配製無色品紅染液時,所使用的偏重亞硫酸鈉試劑質量不合格,則會導致染液配製失敗,無法染出合格的切片。

2、純度一般以分析純為主。

3、購買時儘可能以小劑量購入,不宜過量,並定期進行更換,同時還應有專門的化學試劑存儲庫房,做到防潮、密封、避光等措施,確保試劑的安全保存。

①特殊染色染液(特別是滴染染色)配製試劑用量普遍不大,多以小劑量包裝購買使用;每次使用後密封保存,防止失效。

如配製無色品紅染液中所使用的偏重亞硫酸鈉試劑,必須密封保存及定期更換,當刺激性氣味消失則不可再使用。

②儲存化學試劑須單獨設立專用庫房,必須使用防爆安全櫃存放;每次的試劑出入庫用量也須嚴格登記。


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