技術整理 - 如何選擇轉染方法及試劑
2021-01-15 諾為生物轉染是將外源遺傳物質導入真核細胞的過程，是細胞和分子生物學研究的重要工具。在現代生命可持續研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程，如何將目的基因導入細胞內是科學實驗過程中不可缺少的實驗技術，而細胞轉染是完成這一過程的必需步驟。本期我們就為大家總結一下如何選擇轉染方法並推薦轉染過程中的幾款好評試劑。
不論是質粒、DNA還是各種RNA（mRNA、siRNA或microRNA），要將這些外源核酸轉入細胞並不容易，它們必須穿過細胞膜這層屏障才能進入細胞質。目前應用比較廣泛的技術方法見下圖。
一些傳統的轉染技術，如DEAE右旋糖苷法，磷酸鈣法，電穿孔法，脂質體法各有千秋，很多初學者面對多種方法，會困惑如何選擇一種最適合的實驗方法呢？下面我們對各種方法的特點做了一個總結，純乾貨，不要太感謝哦~
那麼，重點來了！面對市面上如此繁多的轉染試劑，我們在實驗中應該怎麼選擇轉染試劑呢？下面我們就根據不同需要，推薦幾款好評試劑。
陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用將DNA分子包裹入內，形成DNA一脂複合體，也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附，再通過膜的融合或細胞的內吞作用，偶爾也通過直接滲透作用，DNA傳遞進入細胞，形成包涵體或進入溶酶體 其中一小部分DNA能從包涵體內釋放，並進入細胞質中，再進一步進入核內轉錄、表達。
對於普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多採用脂質體法。
下面我們推薦兩款客戶好評率高的脂質體轉染試劑 -
METAFECTENE® PRO（毒性最低轉染試劑）
METAFECTENE® PRO是針對新標準的哺乳動物細胞轉染的最新一代轉染試劑。它融合了Biontex 公司的RMA（斥膜酸解）技術和TOP（毒性優化）技術。顯著提高RMA功能促進DNA釋放進入細胞的效率的同時最小化了對細胞的毒性。
1. 適用於DNA, mRNA, siRNA、miRNA及RNA和DNA的共轉染
2.毒性最低
3.優化的轉染效率
4.無血清抑制性
5.文獻報告豐富、全面
6.專業文獻的廣泛引用
真核細胞依賴自身的先天性免疫系統，能夠識別並抑制外來物質（如脂多糖、細菌、病毒核酸及蛋白質）的入侵。此外，細胞還可以將這些外來物質的信息通過信號分子傳導給相鄰的細胞，使這些臨近細胞在無需接觸病原體的情況下產生防禦體系。
為降低細胞自身的免疫反應，提高基因轉染效率，Biontex公司最新開發了K2® Transfection System，由K2® Transfection Reagent 和 K2® Multiplier兩部分組成。K2® Transfection Reagent是一種高效的陽離子脂質，而K2® Multiplier則可以降低細胞對外來核酸及脂質體的免疫反應。
1.適於DNA, mRNA, siRNA及miRNA的轉染
2.適於DNA和 RNA共轉染
3.特別適合人的細胞
4.與常規轉染試劑相比，在大多數情況下，轉染效率明顯增大
5.降低細胞對外源核酸的識別能力
陽離子聚合物主要靠其本身攜帶的大量陽離子基團，從而跟細胞接觸，黏著在細胞表面。它和DNA形成帶正電荷的複合物。這些複合物通過內吞作用進入細胞，隨後經質子海綿作用，內涵體在細胞質中釋放DNA。因為其並不像脂質體一樣破壞細胞膜結構，所以相對毒性較低。
jetPRIME®是一種日常實驗中既強大又通用的DNA和siRNA轉染工具，可得到有效和可靠的科學結果。 jetPRIME®可以確保在各種貼壁細胞中有很高的DNA轉染效率及基因沉默。 jetPRIME®也是DNA / siRNA共轉染或質粒共轉染的理想選擇。 此外，jetPRIME®試劑對細胞非常溫和，與Lipofectamine 2000相比，轉染細胞活性更高。
1.DNA轉染效率高
2.微量核酸轉染
3.細胞活力高
4.一種用於DNA或siRNA轉染的試劑
5.性價比高
聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，是繼多聚賴氨酸之後發現的第二種聚合物轉染試劑，能將DNA縮合成帶正電荷的微粒，這些微粒可以黏合到帶有負電荷的細胞表面殘基，並通過胞吞作用進入細胞。
1.已優化用於病毒和蛋白產品大量基因表達
2.病毒滴度和蛋白獲得量更高
3.轉染效果安全可靠
4.不含動物源成分
5.無批次間差異
除了能夠對體外培養的細胞進行轉染，現在已經有試劑能夠直接對動物進行體內轉染。
In vivo-jetPEI®是聚合物轉染試劑，適用於多種動物的多種注射方式進行DNA、siRNA和寡核苷酸的體內轉染，是一種非病毒、基於聚合物的轉染方法，無免疫原性、無毒性、無風險。
1.多物種的多種注射方式
2.在治療劑量內，無炎症反應
3.目前已用於Ⅰ期和Ⅱ期臨床實驗
4.可重複性結果
5.操作簡便
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跟上新時代 |是時候給您的轉染試劑升級到Lipofectamine3000了
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細胞轉染的最全知識介紹,收藏這一篇就夠了······
2.化學介導：方法很多，如經典的磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術。3.生物介導：方法有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率最高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。 -
實驗室常用試劑分類整理
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知識分享:細胞轉染
實驗原理：轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染（永久轉染）。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬於通過物理方法將基因導入細胞的範例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率最高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。 -
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乾貨| 手把手教你做細胞轉染(含操作指南)
那麼為了平安度過這道坎兒，選擇一個適合的細胞轉染方法才是至關重要的。轉染方法大比拼眾所周知，細胞轉染技術主要分為三大類：化學法、物理法及生物學法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準的，即沒有任何方法適用於所有細胞和所有實驗。因而只有依據自己的實驗要求選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實驗結果。 -
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