轉染實驗是我們經常做的，可時常讓我們遇到心塞的情況：
轉染效果不明顯，起不到轉染作用；
用力過猛，毒性太大使細胞死掉。
下面讓我們分享一下使用 GenJet™ Ver.II 試劑後的心得和技巧，你會感到：轉染竟可以如此簡單！
針對哺乳動物細胞的 DNA 體外轉染試劑，GenJet™ Ver.II 為你提供兩種不同的轉染步驟——一般步驟及高級步驟，這兩種步驟分別針對不同的哺乳動物細胞。
高級步驟主要針對難轉的哺乳動物細胞，例如：MDCK，MDA-MB231，Caco-2 等細胞。使用一般的轉染步驟若是轉染效率低於 5%，那麼使用高級轉染步驟則可以將轉染效率提升至 60%。
如何選擇轉染步驟，取決於你的細胞特性。
對於諸如 HEK293，Hela，CHO，3T3，COS，HepG2，LNCaP，PC3，PC12，U2-OS，L929，MCF-7 及 Huh-7 等常用細胞，一般的實驗步驟就能得到滿意的轉染結果。
對於諸如 MDCK，MDA-MB231，Caco-2，SaoS-2 及 HUVEC 等難轉細胞，可以選用高級轉染步驟。
針對你的細胞，若是尚不明確選擇哪種轉染步驟，我們建議你可先嘗試一般步驟，如果你使用一般步驟得到的轉染效率低於 5%，那麼你的細胞比較難轉，你可嘗試高級轉染步驟。
關於表皮細胞的轉染，表皮細胞廣泛遍布於身體，正常的表皮細胞較難轉染，尤其是使用基於脂質體技術的轉染試劑。我們使用電轉（Amaxa）方法轉染正常人的結腸表皮細胞並得到了 65% 的 GFP 標記細胞。非常感謝 SignaGen，現在我們使用 GenJet™ Ver.II 可以成功轉染正常人的結腸表皮細胞並且轉染效率顯著提高至 75%。
使用 GenJet™ Ver.II （Cat #SL100489）轉染表皮細胞的簡單步驟：
1、轉染時確保表皮細胞達到 85% 的融合度，並且保證細胞新鮮、健康。
2、對於 6 孔板，用不含血清的 DMEM 分別稀釋 1.0 µg，DNA 及 3.0 µL，GenJet Ver.II（Cat #SL100489）將稀釋好的轉染試劑加入 DNA 中，室溫下放置 15 分鐘以形成轉染複合物。
3、將轉染複合物直接加入表層細胞中：6 孔板，每孔含 1.0 mL 培養基，在血清 / 抗生素存在下，轉染進行。
4、在轉染進行 5 小時後，清除轉染複合物並換成正常生長培養基。
5、轉染後的 24~48 小時，檢測轉染基因的表達情況。
關於轉染 L929 細胞，L929 是小鼠成纖維細胞瘤細胞株，經常被用來檢測 TNF-alpha 及 TNF-beta。對 TNF 的處理經常會引發細胞凋亡及死亡，因此 L929 細胞經常被用作免疫分析。但是，轉染 L929 細胞非常難，尤其使用基於脂質體技術的轉染試劑，我們實驗室使用 GenJet™ Ver.II 轉染 L929 細胞獲得了 75% 的轉染效率。
轉染 L929 細胞簡單的實驗步驟如下：
1、轉染時確保 L929 細胞達到 80% 的融合度，細胞必須健康並且傳代不能超過 9 代。
2、對於 6 孔板，用不含血清的 DMEM 分別稀釋 1.0 µg，DNA 及 3.0 µL，GenJet™ Ver.II 轉染試劑。將稀釋好的轉染試劑加入 DNA 中，室溫下放置 15 分鐘以形成轉染複合物，其它規格的細胞培養器皿，可以根據表面積適當調整 DNA 含量。
3、將轉染複合物直接加入 L929 細胞中；6 孔板，每孔含 1.0 mL 培養基，在血清 / 抗生素存在下，轉染進行。
4、轉染後的 24~48 小時，監測轉染基因的表達情況。
選擇何種稀釋液稀釋 DNA 及轉染試劑，對於製備有效的轉染複合物至關重要。除了溫度，孵育時間外，稀釋液的性質對於製備高效的轉染複合物亦非常重要，同樣影響 DNA 轉染效率。根據我們的實驗數據，使用合適的稀釋液得到的轉染效率是使用錯誤稀釋液轉染效率的至少 50 倍。更為重要的是，實驗者總是忽視稀釋液的重要性，甚至一直未曾意識到正確的稀釋液對形成有效轉染複合物的重要性。
如下實驗技巧，幫助你為 GenJet™ Ver.II DNA 轉染試劑選擇合適的稀釋液：
1、為了製備更有效的轉染複合物，稀釋液中千萬不要含有血清、蛋白。
2、儘量使用接近細胞培養基成分的稀釋液，例如：若是你使用 DMEM（supplemented with serum and antibiotics）培養 HEK293 細胞，那麼，最合適的稀釋液是不含血清、抗生素的 DMEM：若是你使用 RPM1-1640（supplemented with serum and antibiotics）培養 Hela 細胞，那麼最合適的稀釋液是不含血清、抗生素的 RPM1-1640。
3、請勿使用含有未知成分的培養基。例如，切勿使用 Opti-MEMTM 稀釋 GenJet™ Ver.II DNA 轉染試劑。根據我們的實驗數據，若是使用 Opti-MEM 稀釋轉染試劑及 DNA，那麼用於 HEK293，Hela，CHO 及 NIH 3T3 細胞的轉染效率至少減少 50%。Opti-MEMTM 可能含有較少的血清，導致轉染效率的大幅降低。
4、不含血清的高糖 DMEM 是很好的選擇，可以與其他的生長培養基兼容，如果未能得到較高的轉染效率，可能會考慮更換稀釋液。若是不明確如何選擇合適的稀釋液，建議你初次可以嘗試不含血清的高糖 DMEM，應該會得到滿意的轉染效率。
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文章及題圖來源：思科
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