細胞轉染的注意事項

2021-02-08 CellMax胎牛血清

哺乳動物細胞系合成可溶的，翻譯後修飾的蛋白，比細菌，真菌或昆蟲細胞中表達的蛋白更有可能有生物活性。

穩定轉染的細胞可以合成大量的重組蛋白，而瞬時轉染細胞可以快速表達，迅速地合成小量蛋白。常用的細胞系包括CHO，293和COS-7。Invitrogen提供克隆的293-F，293-H，COS-7和CHO-S細胞，來源於經篩選轉染效率更高的亞細胞系。這些細胞也可用於無血清和限定化學成分培養基。重組蛋白的大規模生產一般在穩定轉染的懸浮細胞中進行。這些細胞易於生長到高密度併合成更多蛋白，使用基質珠做為固相支持可以使貼壁細胞懸浮生長。

用於蛋白生產的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養基中進行。但更傾向於使用無血清培養基表達蛋白，因為血清蛋白會干擾下遊表達蛋白的純化。無血清培養基一般針對某一特定細胞類型優化並有幾類無血清培養基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養基低得多）。

無蛋白培養基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學成分的培養基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇最適合您應用的一種。

在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養基，無蛋白培養基或限定化學成分的培養基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對於已適應無血清或無蛋白培養基的細胞，可以使用其培養基進行轉染。其他一些無血清培養基包含抑制陰離子脂質體介導轉染的成分，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養基中進行培養和轉染。

相關焦點

  • 細胞轉染技術集結及注意事項
    本文將從多方面來深度解讀細胞轉染技術及一系列注意事項！細胞轉染是指將外源分子導入真核細胞內以改變其基因型或表型能力的一種技術。轉染的主要目的是研究基因的功能或基因產物，通過增強或抑制特定基因在細胞中的表達，並在哺乳細胞中產生重組蛋白。
  • 知識分享:細胞轉染
    理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率最高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，病毒轉染方法的準備程序複雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。
  • 胚胎幹細胞轉染
    如何將一段螢光標記的寡核苷酸轉染入小鼠胚胎幹細胞中？實驗中該寡核苷酸有24個鹼基，沒有編碼蛋白質的功能，僅僅是起到誘導基因甲基化的作用。幹細胞纏繞方法有有三種，電穿孔法、脂質體轉染辦法、核轉染辦法，其中電穿孔法和脂質體轉染率僅為20%左右，核轉染法轉染率達到80%左右。
  • 細胞轉染技術原理及應用
    ,DNA通過膜上形成的小孔導入 穩定轉染 瞬時性轉染所有細胞 適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大, 需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件 病毒介導法通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 穩定轉染 可用於難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等 逆轉錄病毒
  • 細胞轉染技術大比拼!
    細胞轉染的方法主要包括：人工脂質體法、磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、電穿孔法、病毒轉導法等，上期詳解了細胞轉染常用的方法-脂質體轉染的原理和步驟 等，今天做個細胞轉染技術大比拼，了解各種細胞轉染的方法優缺點，再根據自己的實驗要求選擇理想的方法，獲得漂亮的實驗結果。
  • 細胞&體內轉染新攻略
    轉染實驗方法：                    利用其自身的內吞機制：          轉染會損傷細胞
  • 各種轉染試劑的中文轉染方法
    注意：質粒DNA的質量會顯著影響幾個轉染參數如轉染效率、細胞增殖和細胞毒性、以及對於結果的解釋。因此，只應該使用最高純度的DNA。使用HiSpeed，QIAfilter和QIAGEN Plasmid Kits抽提純化的質粒適合於大多數細胞系的轉染。
  • 淺談胚胎幹細胞轉染方法
    #胚胎幹細胞#幹細胞#科普國際上比較認可的轉染方法：核酸轉染儀是將傳統的電穿孔技術和專用的轉染試劑結合起來的產物 ，針對不同的細胞類型，採用一套最理想的轉染試劑和轉染程序，以達到最理想的轉染效率。核酸轉染儀特別適用於轉染原代細胞和難以轉染的細胞系，如T細胞及PC-12細胞系等。
  • 磷酸鈣法細胞轉染試劑盒的應用
    一、背景 磷酸鈣法細胞轉染試劑盒用於磷酸鈣法轉染細胞,適合於大多數貼壁細胞的轉染。磷酸鈣法細胞轉染試劑盒在傳統的磷酸鈣細胞轉染方法的基礎上進行了改良，提高了轉染效率，並降低了毒性。用磷酸鈣法轉染細胞，不僅可以瞬時表達，也可以篩選穩定株。
  • 慢病毒包裝步驟及注意事項
    現今常用的製備慢病毒載體的方法為使用3或者4質粒系統轉染293T細胞。此外，也有使用其它幾類慢病毒包裝細胞系製備慢病毒載體。 瞬時轉染製備慢病毒： 細胞：慢病毒包裝常用人胚腎細胞(HEK, human embryonic kidney)293T，其含有SV40病毒的大T抗原蛋白編碼基因，轉染效率極高。但其貼壁性不好，所以需要使用多聚賴氨酸包被的培養皿增加其吸附性。多聚賴氨酸培養皿可購買，也可自行製備。轉染前，細胞密度控制在40-70%比較好。
  • 乾貨| 手把手教你做細胞轉染(含操作指南)
    它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用於難轉染細胞、原代細胞的穩定性轉染。同時質粒純化時要注意純化過程中勿使雙鏈斷裂以及無核酸酶和內毒素汙染。同時準備新鮮的培養基，使用前用0.22um濾膜過濾培養基來確保培養基無汙染。細胞培養過程中勿加抗生素，且需要不斷監測細胞的生長情況。當細胞密度達到50-80%時，可用於細胞轉染。
  • 細胞轉染效率低的原因有哪些?
    細胞轉染效率低的原因可從以下幾方面找：1.質粒DNA或混和液中含有血清。 對策：用無血清培養基或Opti-MEM培養基。2.質粒DNA和轉染試劑的比率不是最優 對策：對大多數細胞而言，質粒DNA和轉染試劑的比例為1:2-1:3，一般要做優化實驗，比例從1:0.5-1:5 逐一檢測。3.質粒DNA 已部分降解或質量不夠好 對策：用好的質粒純化試劑確保質粒DNA質量，正確保存，確保質粒DNA不被降解。4.轉染試劑選擇不當。
  • 細胞轉染的最全知識介紹,收藏這一篇就夠了······
    但是，病毒轉染方法的準備程序複雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。需要指出的一點，無論採用哪種轉染技術，要獲得最優的轉染結果，可能都需要對轉染條件進行優化。影響轉染效率的因素很多，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮。
  • siRNA的轉染
    被俘獲的DNA就會被導入培養的細胞。現存對DNA轉導原理的證據來源於內吞體和溶酶體。為了達到高的轉染效率，在轉染實驗過程中，需要注意以下幾點：1.純化siRNA 在轉染前要確認siRNA的大小和純度。注意：化學合成的RNA通常需要跑膠電泳純化（即PAGE膠純化）。 2.避免RNA酶汙染 微量的RNA酶將導致siRNA實驗失敗。由於實驗環境中RNA酶普遍存在，如皮膚，頭髮，所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等，此保證實驗每個步驟不受RNA酶汙染非常重要。
  • HEK293細胞在轉染實驗中的作用
    shRNA首先被包裝成慢病毒載體，然後轉染HEK293細胞。轉染的細胞孵育約3天，此間慢病毒複製和產生慢病毒顆粒，然後收穫，評價滴度，再轉化目標細胞。 二、關於轉染HEK293細胞維持細胞的良好狀態是必要的。HEK293細胞生長迅速，胰蛋白酶化速度快，所以不要在胰蛋白酶中長時間孵育，否則可能會有大量細胞死亡。解凍後的細胞應至少傳代兩次，然後接種進行轉導實驗。
  • LONZA 4D-Nucleofector LV大規模流式細胞核轉染,高效轉染T細胞
    動物細胞轉染技術多樣，包括化學法、病毒轉導、傳統電穿孔法等。化學轉染磷酸鈣沉澱法、DEAE-葡聚糖、脂質體轉染等，操作簡單快捷，但大部分原代細胞、幹細胞、細胞系轉染效率低下，僅有少數貼壁細胞系轉染較高效，批次間重複性差。使用慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒的病毒轉導技術，雖然轉染效率高，但轉染底物有局限，轉染的基因片段大小需<10kb。
  • T細胞轉染，用Nucleofector LV大規模流式核轉染
    動物細胞轉染技術多樣，包括化學法、病毒轉導、傳統電穿孔法等。化學轉染磷酸鈣沉澱法、DEAE-葡聚糖、脂質體轉染等，操作簡單快捷，但大部分原代細胞、幹細胞、細胞系轉染效率低下，僅有少數貼壁細胞系轉染較高效，批次間重複性差。使用慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒的病毒轉導技術，雖然轉染效率高，但轉染底物有局限，轉染的基因片段大小需<10kb。
  • FuGENE6(Roche)轉染步驟
    轉染時，用DNA濃縮緩衝液(EC Buffer)稀釋1ug DNA至100ul總體積(DNA用pH 7-8的TE Buffer溶解，DNA最低濃度：0.1ug/ul)。加入3.2ul Enhancer，渦旋1s以混合溶液。　　重要：請保持DNA與Enhancer比例恆定。　　注意：質粒DNA的質量會顯著影響幾個轉染參數如轉染效率、細胞增殖和細胞毒性、以及對於結果的解釋。
  • CAR-T高效轉染青睞4D-Nucleofector細胞核轉
    在生命科學研究中，將DNA、RNA或蛋白質引入細胞，以改變其基因型或表型的過程被稱為轉染，在各類研究中十分重要。傳統的電穿孔是一種物理轉染方法，通過對細胞施加電脈衝，改變細胞膜的通透性，並通過電場將外源分子移動到細胞中。電穿孔技術是細胞系中轉染大型DNA片段的強大工具，但其高細胞毒性、轉染原代細胞和幹細胞的低效率，限制了其廣泛應用。
  • 轉染產品知多少:轉染試劑選擇工具
    轉染是將核酸導入真核細胞中的過程，是細胞生物學、基因表達和基因抑制實驗中的關鍵步驟。不同的實驗方案和技術差別巨大，我們可以利用化學方法或脂質體將核酸(DNA或RNA)高效輸送到細胞內，也可以使用電穿孔方法利用電流在細胞膜上開孔，使核酸進入細胞內。賽默飛提供了多種高質量的轉染產品，適用於各種細胞類型的轉染。如何選擇最受信賴的可用於轉染的系統，是實驗結果的重要影響因素。