如何將一段螢光標記的寡核苷酸轉染入小鼠胚胎幹細胞中?實驗中該寡核苷酸有24個鹼基,沒有編碼蛋白質的功能,僅僅是起到誘導基因甲基化的作用。
幹細胞纏繞方法有有三種,電穿孔法、脂質體轉染辦法、核轉染辦法,其中電穿孔法和脂質體轉染率僅為20%左右,核轉染法轉染率達到80%左右。
做核轉染比較少見,因為需要特定的器材和試劑;電穿孔轉染率太低;胚胎幹細胞在沒有血清培養時候容易死亡,所以脂質體轉染要求轉染的時候必須有血清。
轉染試劑對細胞毒性很大,還會影響胚胎幹細胞的分化功能。
據專業人士所述:慢病毒轉染方法轉染率還是比較低的,而且寡核苷酸本身沒有任何編碼意義,僅僅是起到誘導某個基因啟動子甲基化作用,所以不需要把基因整合到基因組中去,所以慢病毒不適合這種轉染;後續試驗涉及到分選某種細胞出來做轉基因小鼠,因此對細胞的要求蠻高,脂質體等轉染大大殺死細胞,所以不適合這種轉染。
慢病毒
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