細胞&體內轉染新攻略

2021-03-01 科研好助手


轉染實驗方法：

                    利用其自身的內吞機制：

          轉染會損傷細胞 。

轉染實驗原理：


Polyplus-transfection公司簡介：


jetPRIME 細胞或體外 DNA & siRNA 轉染均可，

產品優勢：

A.具有很高的轉染效率--強有力

      jetPRIME使用至少低於Lipofectamine 2000 兩倍的DNA和試劑的量得到極好的DNA轉染效率。

B.試劑用量少: 用很少的試劑進行更多次的轉染---經濟、高細胞活性；

C.可用於DNA和siNRA的共轉---多功能；

D.和血清、抗生素兼容---操作簡單；


jetPRIME使用至少低於Lipofectamine 2000 兩倍的DNA和試劑的量得到極好的DNA轉染效率。


HEK-293, CHO, HeLa, COS-7, NIH-3T3 ►► 60%的實驗室使用這些細胞

(source: Biocompare® Survey, 2007)

與Lipofectamine 2000 的性價比更實惠：


使用更少的試劑，每支是Lipo2000的2-3倍。

價格對比：


jetPRIME低毒：

jetPRIME® 對細胞比較溫和--- 高細胞活性；

比Lipofectamine 2000有更好的細胞活性；

Phase contrastmicroscopy pictures of HeLa cells 24 h after transfectionaccording to the manufacturer’s recommendations.

jetPRIME操作步驟：


jetPRIME轉染原理：


1. jetPRIME包裹DNA經細胞內吞作用進入細胞 

2. 包涵體內的jetPRIME類似質子海綿作用膨脹

3. 包涵體破裂，DNA進入胞漿

4. 部分DNA進入細胞核

jetPRIME同樣適用於CRISPR/Cas9系統：

相關文獻：Davidson et al., (2014) Genes Dev 28(4):342-56; Moore et al., (2014) Nucleic Acids Res pii : gku 1326; Shi, J., et al. (2014), Nature 514, 187-9

高通量轉染試劑：

jetPEI VS lipo2000（DNA）

複合物更穩定，4小時；

簡易快速的操作步驟，和血清、抗生素兼容；

低毒，轉染時細胞融合度只需50-70%；

單次反應更便宜；

INTERFERin-HTS VS lipo2000（siRNA）

可重複性好；

每孔少用3-20倍的試劑；

與血清和抗生素兼容；

複合物可穩定至8小時；

專門用於高通量篩選的最新一代試劑；

體內成功轉染的分子

DNA

siRNA

plasmid shRNA

mimic miRNA

AntimiR

oligonucleotides


Systemic delivery by tail vein injection of pCMVLuc using in vivo-jetPEI™ and analysed by bioluminescent imaging. Courtesy J.L. Coll

體內操作步驟：


法國polyplus團隊



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