轉染產品知多少(三)——siRNA轉染試劑

2021-01-19 賽默飛生命科學


一般而言，大多數研究人員會選擇siRNA來進行RNAi實驗，因為它們可以快速上手，除了基本的細胞培養技術以外，無需特殊準備，是最常用的RNAi實驗方法。


在開始實施這些工作之前，您需要考慮幾件事情：

◆ 首先，您需要設計針對目的基因的siRNA

◆ 其次，您需要通過siRNA轉染操作將其有效地遞送到細胞中


用於哺乳動物細胞基因抑制的傳統RNAi方法通常使用由兩個未經修飾的21-mer寡核苷酸退火形成的合成RNA雙鏈生成短/小幹擾RNA (siRNA)。Thermo Fisher Silencer Select siRNA和Stealth RNAi siRNA採用專利的化學修飾改善傳統雙鏈，能獲得更好的RNAi結果。


採用siRNA轉染試劑可以將siRNA輕鬆導入細胞內。siRNA分子進入細胞後參與合成了RNA誘導沉默複合物(RISC)。在siRNA反義鏈的引導下，RISC可以降解目的mRNA，抑制其翻譯，然後通過分析檢測RNAi活性。一般會同時設置對照，對RNAi結果進行比較。RNAi的成功取決於正確導入合適量的siRNA，達到最大預期反應。siRNA脫靶效應會導致細胞死亡，並引起分析問題。研究人員一直致力於尋找更好的siRNA轉染試劑。



為了幫助大家獲得更好的實驗結果，Thermo Fisher專門開發了2類轉染試劑，用於siRNA轉染。

Lipofectamine™  RNAiMAX 

Transfection Reagent


輸送siRNA和mRNA進行基因抑制試驗的金標準

Lipofectamine RNAiMAX轉染試劑是先進、高效的siRNA輸送解決方案。目前尚無其他siRNA專用轉染試劑能夠在廣泛的細胞系中（包括常見細胞類型、幹細胞、原代細胞以及歷來難轉染的細胞類型）提供如此簡便、高效的siRNA輸送效果。


圖1. 相對於其他的siRNA轉染試劑，Lipofectamine RNAiMAX 轉染試劑可以獲得更佳的基因抑制效果。同在10 nM和1 nM p53 siRNA下，Lipofectamine RNAiMAX轉染試劑實現了更高的有效抑制細胞/未轉染細胞比率，超過其他RNAi試劑。


低毒

低細胞毒性，易於優化


圖2. 採用Lipofectamine RNAiMAX轉染試劑轉染A549細胞時，實現了最佳的基因抑制效果和最低的細胞毒性。試驗採用的Lipofectamine RNAiMAX 試劑劑量範圍為0.1 μL-1.0 μL之間，在維持優良的細胞活力的同時，實現了p53基因表達水平的有效敲低.

 

功能多樣

簡便的實驗方案，

易於針對廣泛的細胞系進行優化

 

Invivofectamine™ 3.0 Reagent


突破性的體內轉染試劑

Invivofectamine 3.0試劑是一種突破性的體內RNAi輸送試劑，可大幅改善實驗性能，使用微克級的siRNA即可達到高達85%的敲低效果。


易於使用

siRNA複合物只需數個步驟即可完成輸送


圖3. 用於轉染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi複合物非常容易獲得：只需簡單地混合，並進行孵育（30min）、稀釋、及注射即可。


高效、靶向敲低

在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果


圖4. 使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射後即可在肝臟中實現靶向敲低。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的複合物，以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進行注射，最終靶向mRNA水平出現了高達85%的敲低（使用TaqMan分析對敲低進行評估）。


siRNA樣品需求量更少

相比過去的試劑，最多可少用90%的siRNA完成有效敲低


圖5. Invivofectamine 3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射後可在肝臟中引起劑量反應的敲低現象。Invivofectamine 3.0試劑與靶向FVII的Ambion in vivo siRNA以0.02到2 mg/kg的劑量進行注射。隨後分離血清並檢測FVII蛋白的水平（Biophen 顯色檢測）。


持續敲低能力

在單次注射後可觀察到更長的敲低時間


圖6. 使用三種不同濃度的靶向Factor VII (FVII)的siRNA研究劑量效應。siRNA分子與Invivofectamine 3.0試劑形成複合物後分別以1、0.5、及0.25 mg/kg的劑量進行注射。在第2、5、9、16、23及30日收集血清，並使用顯色法對血清進行分析以確定FVII蛋白的敲低效果。


低毒性

複合物表現出極低的體內毒性


圖7. 對注射了Invivofectamine 3.0 試劑的小鼠樣品進行血液化學分析。將Invivofectamine 3.0試劑與靶向FVII的Ambion in vivo siRNA的複合物分別以1 mg/kg [1], 3 mg/kg [3], 或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內。在注射後2、24及48小時收集血液樣品，並通過臨床化學檢測方法對數個生物標誌物(Antech)進行評估。結果表明在使用Invivofectamine 3.0試劑進行轉染的每個個體間所檢測的生物標誌物的水平與未注射該試劑的個體相比並沒有顯著差異。

 

除了以上兩種專用於siRNA的轉染試劑，還有通用型轉染試劑Lipofectamine™ 2000，Lipofectamine™ 3000和Neon™轉染系統也可以用於siRNA轉染，小編今天就不一一給大家介紹了，點擊閱讀原文，了解更多產品信息。

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