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知識分享:細胞轉染
實驗原理:轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。常見的轉染方法及比較轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優化DNA與轉染試劑比例、細胞數量、培養及檢測時間等。
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轉染產品知多少:轉染試劑選擇工具
今天,我們就來聊一聊如何從為數眾多的轉染試劑裡面,選擇最適合的產品。根據不同實驗類型,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內部,包括最常見的DNA,用於基因編輯的siRNA,能夠更快表達蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是體內轉染。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產品的第一步。
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各種轉染試劑的中文轉染方法
> 圍觀256次 我要分享 FuGENE6(Roche)轉染步驟:轉染前一天將細胞分至培養板,轉染當天細胞應50-80%融合。
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技術整理 - 如何選擇轉染方法及試劑
在現代生命可持續研究中,大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程,如何將目的基因導入細胞內是科學實驗過程中不可缺少的實驗技術,而細胞轉染是完成這一過程的必需步驟。本期我們就為大家總結一下如何選擇轉染方法並推薦轉染過程中的幾款好評試劑。
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這款編輯器讓你「所見即所得」
該項目最大的亮點在於:你編寫的 LaTeX 代碼能夠立刻展示實際的效果,所見即所得。這個編輯器還是基於瀏覽器的,還支持雲文件存儲。項目地址:https://github.com/SwiftLaTeX/SwiftLaTeX所見即所得的 LaTeX 編輯器據作者介紹,SwiftLaTeX 是一個基於網絡瀏覽器的 LaTeX 編輯器,可以創建諸如報告、項目、PPT 等 PDF 文件。當你在編寫 LaTeX 代碼的時候,寫好的代碼可以立刻轉換為實際的格式效果。編輯器分為兩部分。
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乾貨| 手把手教你做細胞轉染(含操作指南)
那麼為了平安度過這道坎兒,選擇一個適合的細胞轉染方法才是至關重要的。轉染方法大比拼眾所周知,細胞轉染技術主要分為三大類:化學法、物理法及生物學法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準的,即沒有任何方法適用於所有細胞和所有實驗。因而只有依據自己的實驗要求選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實驗結果。
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轉染產品知多少(三)——siRNA轉染試劑
siRNA脫靶效應會導致細胞死亡,並引起分析問題。研究人員一直致力於尋找更好的siRNA轉染試劑。為了幫助大家獲得更好的實驗結果,Thermo Fisher專門開發了2類轉染試劑,用於siRNA轉染。目前尚無其他siRNA專用轉染試劑能夠在廣泛的細胞系中(包括常見細胞類型、幹細胞、原代細胞以及歷來難轉染的細胞類型)提供如此簡便、高效的siRNA輸送效果。圖1. 相對於其他的siRNA轉染試劑,Lipofectamine RNAiMAX 轉染試劑可以獲得更佳的基因抑制效果。
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細胞轉染技術原理及應用
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染).前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用於啟動子和其它調控元件的分析.一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染後24-72小時內(依賴於各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如螢光蛋白
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細胞轉染效率低的原因有哪些?
細胞轉染效率低的原因可從以下幾方面找:1.質粒DNA或混和液中含有血清。 對策:用無血清培養基或Opti-MEM培養基。2.質粒DNA和轉染試劑的比率不是最優 對策:對大多數細胞而言,質粒DNA和轉染試劑的比例為1:2-1:3,一般要做優化實驗,比例從1:0.5-1:5 逐一檢測。3.質粒DNA 已部分降解或質量不夠好 對策:用好的質粒純化試劑確保質粒DNA質量,正確保存,確保質粒DNA不被降解。4.轉染試劑選擇不當。
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細胞&體內轉染新攻略
轉染實驗方法: 利用其自身的內吞機制: 轉染會損傷細胞
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跟上新時代 |是時候給您的轉染試劑升級到Lipofectamine3000了
自1993年問世以來,Invitrogen Lipofectamine轉染試劑幫助科學家更容易地實現基因編輯,促進基因功能研究新發現的同時,成為最廣泛使用的轉染試劑,文獻引用超50,000次。▼想做任何一個領域的大牛都要與時俱進,Lipofectamine也不例外。
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知識分享:PLM-Puromycin試劑說明書
轉染前一天鋪HEK293細胞,培養基為含10% FBS 的DMEM培養基,以6 well plate為例,細胞數目約為0.5x106 cells。2. 在無菌管中加入目的DNA質粒(1-2 ug)及無血清的DMEM或者Opti-MEM。
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所見即所得,新氧用VR創建「記憶宮殿」
(原標題:所見即所得,新氧用VR創建「記憶宮殿」)
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淺談胚胎幹細胞轉染方法
#胚胎幹細胞#幹細胞#科普國際上比較認可的轉染方法:核酸轉染儀是將傳統的電穿孔技術和專用的轉染試劑結合起來的產物 ,針對不同的細胞類型,採用一套最理想的轉染試劑和轉染程序,以達到最理想的轉染效率。核酸轉染儀特別適用於轉染原代細胞和難以轉染的細胞系,如T細胞及PC-12細胞系等。
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胚胎幹細胞轉染
如何將一段螢光標記的寡核苷酸轉染入小鼠胚胎幹細胞中?實驗中該寡核苷酸有24個鹼基,沒有編碼蛋白質的功能,僅僅是起到誘導基因甲基化的作用。幹細胞纏繞方法有有三種,電穿孔法、脂質體轉染辦法、核轉染辦法,其中電穿孔法和脂質體轉染率僅為20%左右,核轉染法轉染率達到80%左右。
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「轉染」 可以不是一件讓你頭痛的事
傳代次數過多可能會降低轉染效率。我們不推薦超過20-30次傳代的細胞。如果轉染性能下降並且細胞已經培養過很長時間或過度/不當傳代,我們建議您從液氮中復甦一瓶新細胞重新培養。不可以,轉染效率和每個孔所用試劑的量密切相關,並可能因試劑而異。為了獲得最佳轉染效率,請參考隨轉染試劑提供的產品信息。
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轉染竟可以如此簡單
下面讓我們分享一下使用 GenJet™ Ver.II 試劑後的心得和技巧,你會感到:轉染竟可以如此簡單!針對哺乳動物細胞的 DNA 體外轉染試劑,GenJet™ Ver.II 為你提供兩種不同的轉染步驟——一般步驟及高級步驟,這兩種步驟分別針對不同的哺乳動物細胞。高級步驟主要針對難轉的哺乳動物細胞,例如:MDCK,MDA-MB231,Caco-2 等細胞。
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細胞轉染的最全知識介紹,收藏這一篇就夠了······
每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇最適合實驗設計的轉染試劑。當然,最適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。2.細胞狀態 一般低的細胞代數(<50)能確保基因型不變。最適合轉染的細胞是經過幾次傳代後達到指數生長期的細胞,細胞生長旺盛,最容易轉染。
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siRNA的轉染
磷酸鈣-DNA複合物粘附到細胞膜並通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉澱物的大小和質量對於磷酸鈣轉染的成功至關重要。在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準,保證質量,因為甚至偏離最優條件十分之一個pH都會導致磷酸鈣轉染的失敗。2.電穿孔法電穿孔通過將細胞暴露在短暫的高場強電脈衝中轉導分子。
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細胞轉染技術集結及注意事項
① Nucleofector™設備,包括針對每種優化的細胞類型進行預編程的獨特電參數,可將底物直接遞送至細胞核和細胞質。不同的平臺針對各種應用提供了不同的規格。② Nucleofector™套件,包含專用的Nucleofector™解決方案和所需試劑耗材。這些充當高轉染效率和細胞生存力的保護環境,同時保持生理相關的細胞狀況。