第六節 免疫膠體金銀細胞化學染色的固定劑選擇

2021-01-09 生物谷

第六節　免疫膠體金銀細胞化學染色的固定劑選擇

　　免疫膠體金銀染色和其它免疫細胞化學方法一樣，要想得到好的染色效果，關鍵取決於標本處理是否合適，只有使抗原性及組織結構保存的好，才能使以後的染色成功成為可能，其次要用高特異性和高效價的一抗，選擇合適的稀釋度。由於免疫組化方法廣泛應用於不同的生物學科，所要檢出的抗原種類繁多，性質也各不相同。因此，不可能有一種適用於所有抗原的固定劑，而是根據不同的抗原性質區別對待。根據我們使用的固定劑介紹如下，供參考。

　　一、固定劑的選擇及固定時間（詳見表5-9）

　　（1）Karovsky＇s 液pH7.3。

　　（2）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative）

　　配製見附錄一。

表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時間

待檢抗原 固定劑的種類 固定時間 蛋白質 　 　 酶 冰凍切片不固定，或用95%乙醇，B

5

固定液 10 min 激素 冰凍切片，塗片，印片，不固定或丙酮，甲 10 min 醇，乙醇，PEG固定，B

5

固定液固定 4

℃

30 min 免疫球蛋白 中性福馬林，四氯化碳（1%甲醛） 30 min 白蛋白 95%乙醇含1～5%冰醋酸 30 min 纖維蛋白元 同上 30 min 病毒 丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚 30 min 糖蛋白 PLP，丙酮 30 min 脂質Forssman 中性福馬林 20 min 抗原 2.5%硫代硫酸鈉，冰凍切片不固定 20 min 免疫電鏡 PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG、ECD-G等 30min

　　二、切片的處理與粘附。

　　免疫組化染色過程較長，洗的次數很多，而且均在振蕩洗滌，抗原片附貼不緊，往往在最後的時刻，還沒有等顯色就會脫落導致前功盡棄，這個環節　雖小卻會影響大局，因此，為了保證切片染色成功必須把切片處理好，解除掉片的後顧之憂（方法見第一章　）。

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