免疫螢光染色技術您知多少?

免疫螢光技術就是將不影響抗原抗體活性的螢光色素標記在抗體（或抗原）上，其與相應的抗原（或抗體）特異性結合後，用特定儀器可使特異性的螢光物質被定位和定量識別，可助您靶向定位目標蛋白及進行定量的統計分析。

一、直接免疫螢光染色

基本原理：已知抗體+螢光素=特異性螢光抗體。

染色時：螢光抗體與載玻片上組織中的抗原結合，在螢光顯微鏡下即可觀察到目標抗原。

二、間接免疫螢光染色

基本原理：特異性的一抗與細胞表面的抗原結合後，再用螢光二抗，與已形成的抗原抗體複合物結合。

此處，值得注意的是：

1）二抗的結合位點是一抗；

2）2-3個二抗能同時接合在同一個一抗分子上；

3）同上，在螢光顯微鏡下可準確識別到目標抗原。

三、直接與間接免疫螢光方法之間的區別

1. 直接免疫螢光：

優點：

缺點：

2. 間接免疫螢光：

優點：

缺點：

此法需選擇適當的二抗，且步驟相對較多。

二抗可能與非靶標成份發生交叉反應。

綜上所述，直接免疫螢光染色技術似乎簡單一些，但受限於市售試劑種類少，以及目標螢光相對較弱，常常是欲選而不能。所以不用猶豫，可以大膽選擇間接免疫螢光染色技術。

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