免疫螢光技術

2020-11-24 生物谷

免疫螢光技術

來源：來源網絡 2007-03-21 21:50

螢光抗體技術：

      ㈠抗原片的製作
      ㈡試驗類型
      ㈢螢光顯微鏡檢查
  ㈠抗原片的製作
  1 製作：
    *臨床常見的標本有組織、細胞細菌三大類。

    *可採用塗片、印片或切片方式製備抗原片。
    *細胞採用塗片、印片或切片的方式製備抗原片。
    2 標本的固定：
    ⑴ 固定目的
    *防止細胞、細菌或切片從玻片上脫落。
    *去除組織中妨礙抗原抗體結合的類脂質。
    *易於保存。
    *（但CD、SIg的檢測不進行固定，而採用活細胞染色）。
    ⑵   常用的固定方法：
      抗原           固定劑               固定方法
    蛋白質         95%乙醇           室溫3~10min或4℃30min
        Ig類           甲醇                   同上
      酶類           丙酮                   同上
      激素           CCl4                           同上
      類脂質         10%福馬林           室溫3~10min
        多糖(細菌)         10%福馬林       室溫3~10min或4℃30min
                          丙酮、甲醇
      病毒           無水乙醇         室溫5~10min或4℃30~60min
                            丙酮、CCl4             或-20 ℃60min以上

    ㈡試驗類型
      1 直接法

2間接法

3補體結合法

其它免疫螢光技術
    流式細胞儀
    時間分辨免疫螢光技術
    螢光偏振免疫分析技術
    時間分辨螢光免疫測定
(time-resolved fluoresence immunoassay,TR-FIA)
基本原理是：利用具有雙功能基團結構的螯合劑，將鑭系元素標記到抗體（或抗原）上，經免疫反應形成複合物，由於鑭系元素能發出螢光，故分離除去未結合的成分後，利用時間分辨螢光儀即可測定螢光強度，從而推測待測物含量。

    時間分辨螢光測定的特點：
    1 採用脈衝光源(每秒閃爍1000次以上的氙燈),
    照射樣品後即暫短熄滅.
      2 以電子設備控制延緩時間，待非特異本底熒
    光衰退後，再測鑭系螢光。
    3 鑭元素具有較長的螢光壽命(105ns)，延緩測量時
      間，能有效地消除非特異本底螢光(10ns)的幹擾，
    4 鑭系螯合物的激發光與螢光發射峰之間的波長差
      異(即較大的Stokes位移），有利於排除非特異性
      螢光幹擾，提高檢測特異性。鑭系元素有Eu、Sm
        Tb、Nd 和Dy等，其中以Eu最為常用。
    5 測定技術類型有：競爭法、夾心法、間接法等。
  
    螢光偏振免疫分析技術（fluorescence polarization immunoassay,FPIA）是利用螢光素經單一波長的偏振光照射後吸收光能，釋放出相應的偏振螢光，螢光偏振程度與螢光分子大小成正比的關係而建立的免疫分析技術；技術類型主要採用競爭法。

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