免疫螢光技術簡介

2020-11-24 生物谷

免疫螢光技術簡介

來源：來源網絡 2007-03-21 21:46

一些基本概念和基本知識：

1 螢光免疫測定技術的概念：將試劑抗原或試劑抗體用螢光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應後，測定複合物中的螢光素，這種免疫技術，稱為免疫螢光素技術。
2.技術分類：
  ⑴螢光抗體技術(螢光顯微鏡技術)
      抗原抗體反應後，利用螢光顯微鏡判
      定結果的檢測方法。

  ⑵ 免疫螢光測定技術：
      抗原抗體反應後，利用特殊儀器測定
    螢光強度而推算被測物濃度的檢測方法
3.螢光的產生：
          物質吸收外界能量而進入激發狀態，在回復基態時多餘的能量以電磁輻射的形式釋放，即發光，這種光稱為螢光。
          這種物質，稱為螢光素           
      由光激發所引起的螢光，為光致螢光
                            ------螢光免疫技術      
      由化學反應所引起的螢光，為化學螢光
                            ------化學發光技術
4.螢光素的螢光特性：

⑴ 停止供能，螢光現象隨即終止
⑵ 對光的吸收和螢光的發射具高度選擇性
      入射光波長<發射光波長
⑶ 螢光效率：           發射螢光的光量子數
          螢光效率=-------------------------------
                            吸收光的光量子數
  ⑷ 螢光猝滅現象：螢光素的輻射能力減弱
5.常見螢光素：
  
  ⑴ FITC
  ⑵ RB200
  ⑶ TRITC
  ⑷ 鑭系：Eu、Tb
  ⑸ PE
  ⑹ 其它
常見螢光素的特性：
  ⑴ FITC：黃色結晶粉末，吸收光：490~495nm，
          發射光：520~530nm，明亮的黃綠色螢光。
  ⑵ RB200： 橘紅色粉末, 吸收光570nm，發射光
                  595~600nm，橘紅色螢光。
  ⑶ TRITC： 紫紅色粉末，吸收550nm，發射光                 
                  620nm，橙紅色螢光。
  ⑷ 鑭系：Eu、Tb
  ⑸ PE：吸收光490~560nm，發射光595nm，紅色
              螢光。
  ⑹ 其它：酶作用後產生螢光物質。
酶作用後產生螢光物質：
酶     底物     產物     激發光   發射光
Β-G     MUG     MU       360         450
AP     MUP     MU       360         450
HRP   HPA     二聚體     317       414     
6.合適螢光素的選擇
  ⑴ 具有與蛋白質形成共價鍵的化學基團。
    螢光素-N=C +NH-蛋白質       螢光素-N-C-N-蛋白質
                  ‖   ︱                         ︱‖ ︱
                  S   H                           H S H
  ⑵ 螢光效率高，標記後下降不明顯。
  ⑶ 螢光色澤與背景色澤對比鮮明。
  ⑷ 標記後能保持生物學活性和免疫活性
  ⑸ 標記方法簡單、快速。
  ⑹ 安全無毒

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