腸道器官下基因組CRISPR篩查識別TGF-β抑制因素

2020-11-02 AbMole生物

AbMole精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：人腸道器官下基因組尺度CRISPR篩查識別TGF-β的抑制因素

正向遺傳篩查與全基因組CRISPR庫是解決細胞和信號通路的強大工具。然而，將這種技術應用於類器官組織一直受制於技術上的局限。本研究中，研究人員通過捕獲單個類器官中的sgRNA整合物，提高了CRISPR篩選的準確性和穩健性，大大減少了基因組規模篩選所需的細胞數量。將這一方法應用於野生型和APC突變的人類腸道類器官，能夠識別TGF-β介導的生長抑制(結直腸癌進展中的關鍵過程)抵抗基因，並驗證了包括腫瘤抑制機制中SWI/SNF染色質重塑複合體的多個亞基的作用。這些基因的突變需要APC的同時失活來促進TGF-β的抗性和減弱TGF-β靶基因的轉錄。上述方法可以應用於各類測定和不同類器官類型，以促進初級三維組織模型的生物學新發現。抑制劑Y-27632 (Abmole, M1817，純度：99.66%) 用於幹細胞的培養，在每個克隆步驟後的前3天加10 µM於培養基中。

研究人員在建立類小腸和結腸類器官模型時，在培養介質中引入Y27632，並成功製備得到類器官模型用於後續機理檢測，獲得了喜人的結果。

鳴謝：Ringel et al., 2020, Cell Stem Cell 26, 431–440

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