流式細胞儀檢測細胞周期

2020-11-24 騰訊網

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周期分析

操作篇

寫在前面

流式細胞術的原理篇我先賣個關子，先來個簡單的周期分析操作篇~

通過流式細胞術進行DNA周期分析，可以測定細胞的DNA含量哦~

準備工作☞☞☞製備單細胞懸液於200 μl的PBS緩衝液中；加入2 ml預冷的70%乙醇，4 ℃保存；

步驟

1.腫瘤細胞按300,000-500,000細胞/孔接種於6孔板中；24小時後，加入藥物；24-72小時後，EDTA消化並收集細胞，取單細胞懸液1-2×106個細胞於PBS（PH=7.2）緩衝液中；

2.1500 rpm離心5分鐘，棄上清，反覆兩次；

3.重懸細胞於0.5 ml PBS緩衝液中（第二次在eppendenf管中）；

4.加入1 ml冷75%乙醇，混勻，保存於4 ℃（或-20 ℃），至少30分鐘。在-20 ℃條件下可保存2-3周；

5.1500 rpm離心5分鐘，去上清，用500 μl PBS重懸細胞，加入5 μl RNaseA消化，去除RNA影響；

6.加PI染液5μl重懸細胞，室溫避光20-30分鐘；

7.若有明顯的黏附，需再用篩網過濾；

8.上機檢測。488 nm激發波長測定。

注意：

1.根據實驗的要求，固定劑也可選用1-3%多聚甲醛；

2.將乙醇作為固定劑時，乙醇應預冷至0-4 ℃；

3.細胞在固定時，固定劑應緩慢滴入細胞懸液中，使固定劑的濃度緩慢增加，並不斷震搖，以免細胞成團（特別是用乙醇固定時）；

4.單細胞濃度應為106/ml，以免影響CV值和檢測結果。

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相關焦點

  • 流式細胞儀原理及應用
    流式細胞術檢測的對象是呈獨立狀態懸浮於液體中的細胞，不能直接檢測組織塊中的細胞，必須先用各種方法將臟器或者組織製備成為單細胞懸液，然後標記上螢光素偶聯抗體，才能夠被流式細胞儀檢測；流式細胞術可以定量檢測樣品細胞的物理化學特徵，其定量是以光信號為基礎的，通過分析接收到的雷射照射到細胞後的散射光信號和螢光信號完成定量分析。
  • 流式細胞儀的那些事兒
    流式細胞術與流式細胞儀的概念　　流式細胞術(flow cytometry , FCM)：是一種定量分析技術，是指利用流式細胞儀檢測細胞特異性標記螢光信號而測定細胞的多種生物物理性質的方法，同時也是一項可以把具有某相同螢光信號特性的某些細胞亞群從多細胞群體中分離和富集出來的細胞分析技術。
  • 淺談流式細胞儀
    從此，流式細胞儀進入了飛速發展的時代， Bekman coulter、BD、DAKO、 Cytopcia等公司等相繼推出各具特色的流式細胞儀並不斷升級完善，使檢測性能不斷提高。國產流式細胞儀最早研製於20世紀80年代初，但受到當時科技發展和國內生產力的限制，而沒有商業化的產品問世。
  • 流式細胞儀
    流式細胞儀流式細胞儀是一種測量細胞螢光信號的精密儀器，具備高通量、高靈敏度、高精確度定量及多通道測量等特點，其高速細胞分選的純度更可達
  • 簡單介紹流式細胞儀
    流式細胞儀就是進行流式細胞分析的儀器，它集電子技術、計算機技術、雷射技術、流體理論於一體，是一種非常先進的檢測儀器，被譽為試驗室的「CT」。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區域。　　流式細胞儀通常以雷射作為發光源。經過聚焦整形後的光束，垂直照射在樣品流上，被螢光染色的細胞在雷射束的照射下，產生散射光和激發螢光。
  • 流式細胞儀主要技術指標
    1．流式細胞儀的分析速度：一般流式細胞儀每秒檢測10002．流式細胞儀的螢光檢測靈敏度：一般能測出單個細胞上<600個螢光分子,3．前向角散射（FSC）光檢測靈敏度：前向角散射（FSC）反映被測細胞的大小
  • 艾森生物:流式細胞儀是細胞治療領域中重要的研發依託
    2019年，唯公科技研發的Easycell系列流式細胞儀也將獲證上市。此外，博奧生物、競天生物等國產廠商也於近年紛紛發布流式細胞儀產品，可見流式細胞儀市場生機勃勃。　　如今國內流式細胞儀廠商近30家，流式細胞儀技術不斷發展，儀器不斷小型化到微流控，融合顯微成像技術，未來應用前景十分廣闊，可以滿足更多用戶的需求。
  • 流式細胞儀知識大盤點
    1934年，Moldavan使懸浮的紅細胞從一個毛細玻璃管中流過，每個通過的細胞可被一個光電裝置記錄下來。這就是流式細胞儀的雛形。1965年，Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數同時測量未染色細胞，給出細胞中核酸的含量和細胞大小。奠定了多參數流式細胞測量的基礎。
  • 海闊天空的流式細胞儀應用市場
    流式細胞儀的發展已有數十年，為何各廠商近年紛紛選擇布局流式細胞儀市場?流式細胞儀市場有什麼樣的特點？為了對我國流式細胞儀市場發展情況作必要解讀和評價，儀器信息網邀請流式細胞儀市場專家郭強，談談流式細胞儀市場發展的潛力。
  • 中國流式細胞儀市場調研報告(2020年)發布
    流式細胞儀在我國市場增長已經進入到穩步上升階段。目前流式細胞儀主要應用於科研領域和臨床領域。在科研領域的應用以免疫、腫瘤、單細胞研究為主；在臨床上，流式細胞儀主要應用於淋巴細胞亞群分析及絕對計數、HLA-B27的檢測以及血液病/淋巴瘤的免疫分型。
  • 淺談流式細胞儀十大發展趨勢
    應用對象從細胞到顆粒　　一般而言，流式細胞儀檢測的對象是細胞，而且是呈獨立狀態的懸浮於液體中的細胞，即單細胞懸液。組織和器官中的細胞，必須用各種方法製備成單細胞懸液，才能進行檢測。　　細菌、浮遊生物等也可以用流式細胞儀分析。　　一些不是細胞的單個粒子，如病毒、細胞核、染色體、原生質體等也是流式細胞儀的檢測對象。
  • 技術專家眼中流式細胞儀的「用武之地」
    三位技術專家分別為艾森生物流式細胞儀全球支持經理Garret Guenther，賽默飛世爾抗體、免疫分析、蛋白質和細胞分析副總裁兼總經理Dara Grantham Wright和伯樂實驗室細胞生物學全球應用及協作經理Yasha Talaga。問題一：流式細胞儀作為研究工具不斷發展。在實驗室外，流式細胞儀在哪些方面做出了重要貢獻？
  • 非成像式流式細胞儀的發展與應用
    流式細胞儀（Flow Cytometer）是集雷射技術、光電檢測技術、細胞螢光化學技術、單克隆抗體技術以及計算機技術於一體的新型高科技儀器。它能夠高效檢測細胞大小、粒度、表面積等細胞結構參數和細胞表面 / 胞質 / 核的特異性抗原、細胞內細胞因子、酶活性、Ca2+、細胞活性等細胞功能參數， 同時還具有細胞分選和計數能力。
  • 南京地理與湖泊所大型儀器流式細胞儀安裝
    近日，南京地理與湖泊所新購進的美國BD公司的FACSVantage SE流式細胞儀安裝完畢，並進入實驗檢測階段。該儀器是由科學院、研究所和太湖生態系統研究站共同購置的我所大型儀器之一。    流式細胞儀是集雷射、光機電和計算機技術於一體的高技術精密儀器。是一種快速對單細胞定量分析技術。
  • 由表及裡——探究流式細胞儀
    流式細胞儀是一種可以對細胞進行定量分析和分選的儀器，它可以實現在功能水平上實現對單個細胞或亞細胞以及其他生物粒子快速分析
  • 2013年生命科學儀器盤點:流式細胞儀,成像設備新產品
    其後又經過Coulter、Parker&Horst、 Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不斷改進，設計了光電檢測設備和細胞分選裝置，完成了計算機與流式細胞儀的物理連接及多參數數據的記錄和分析，開創了細胞的免疫螢光染色及檢測技術，推廣流式細胞儀在臨床上的應用。
  • 巴中市貝克曼流式細胞儀二手CytoFLEXS現貨
    面面俱到的桌面型流式細胞儀CytoFLEX S 系列流式細胞儀是 CytoFLEX平臺的延伸產品。CytoFLEX 流式細胞儀配備三色雷射選項，波長分別為 488 nm、638 nm 和 405nm。CytoFLEX S 流式細胞儀平臺擁有四個雷射選項、多種配置以及針對您研究領域的獨特濾光片組，從而拓展研究的可能性。
  • 臨床型流式細胞儀大盤點(2019版)
    BD FACSCalibur常規臨床型流式細胞儀FACSCalibur是雙雷射、四色臺式流式細胞儀，可同時應用於細胞分析和分選。Navios的流式細胞分析儀與先進的光學設計結合提高靈敏度和信號解析度，可用於多色檢測和高速數據採集。
  • 流式細胞儀這麼火,國產流式江湖了解一下?
    目前，流式細胞分析已普遍應用於免疫學、血液學、腫瘤學、細胞生物學、細胞遺傳學、生物化學等臨床醫學和基礎研究領域，是生物學和醫學研究、藥物開發、臨床檢測和環境監測的必備儀器。流式市場發展迅猛，中國年增長率近30%流式市場在近十年發展非常迅速。
  • 流式細胞儀檢測技術操作方法、試劑配方、注意事項介紹
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