概述
RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆轉錄PCR，是將RNA的逆轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增反應（PCR）相結合的技術。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞/組織中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。
目的
檢測目的基因的轉錄產物mRNA的水平
原理
提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，從而獲得目的基因或檢測基因的表達。
步驟
1.總RNA的提取（以細胞為例）
1.1棄去培液，PBS洗2遍，加入1ml Trizol，輕輕吹打，直至細胞脫落，吸入1.5 ml EP管內，靜置5 min。（Trizol量根據細胞密度可適當調整，建議：6孔板細胞長滿~1ml Trizol）
1.2 加入200μl氯仿（三氯甲烷），用手劇烈震蕩15秒，室溫靜置2-3分鐘。（氯仿量為1/5 Trizol）
1.3 12000g，4℃，離心15min。
1.4 仔細轉移上層水相到1個新EP管中，不能貪多，約400-500μl。
1.5加等體積異丙醇，輕柔混合4～5次，室溫放置10分鐘。
1.6 12000g，4℃，離心10min。
1.7輕輕倒去上清，用20 μl槍輕輕吸去殘液，沉澱用1ml 75%乙醇（0.75ml無水乙醇＋0.25ml DEPC水，現配）洗1～2次，渦旋混勻。
1.8吸去上清，5-10分鐘空氣乾燥RNA。（肉眼不能明顯看到水分即可）
1.9加15-20μl DEPC水，吹打數次，測濃度。
注釋：
1.mRNA不穩定，很容易講解，因此mRNA提取過程中要儘量避免RNA酶汙染。
2.RT：（參照商品化試劑盒說明書）
3.PCR：（參照商品化試劑盒說明書）
4.電泳鑑定：行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察結果。
5.密度掃描、結果分析：採用凝膠圖像分析系統，對電泳條帶進行密度掃描。