普馬拉病毒實時螢光定量RT-PCR方法的建立

2021-01-10 中國質量新聞網

　　楊鵬飛1,2，燕清麗1,2，張麗萍1，徐煥洲1，王玉春1，甄維1，胡孔新1*

　　1.中國檢驗檢疫科學研究院衛生檢驗檢疫研究所，北京 100123；2.淮安市疾病預防控制中心

　　摘要：目的 建立一種適應國境口岸地區特定鼠種中普馬拉病毒實時螢光定量RT-PCR檢測方法。方法 利用BeaconDesigner7.0軟體設計引物和探針，以人工合成普馬拉病毒S基因的片段作為模板，進行實時螢光定量RT-PCR檢測，並驗證該方法的靈敏度及特異性。結果模板的Ct值與模板稀釋濃度的對數存在良好的線性關係，標準曲線y = -3.122 x + 38.605，R2　=　0.995，PCR擴增效率為109.1%，其最低檢出限為31.6 copies/μl。結論建立的實時螢光定量RT-PCR方法特異性好、靈敏度高，適合於普馬拉病毒的快速檢測。

　　關鍵詞：普馬拉病毒;定量;實時螢光RT-PCR

　　中圖分類號：R373 文獻標識碼：B

　　Establishment of quantitative real-time RT-PCR of Puumalavirus

　　YANG Peng-fei*, YAN Qing-li, ZHANG Li-ping, XU Huan-zhou, WANGYu-chun, ZHENG Wei, HU Kong-xin

　　Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing100123,China

　　Abstract:   Objective   To establish aquantitative real-time fluorescence RT-PCR (qRT-PCR) method fordetecting Puumala virus(PUUV) from some rodents at frontierports.   Methods    The twin primers andthe TaqMan probe were designed and synthesized based on the S genesegment of PUUV, and the real-time RT-PCR was developed for testingthe sensitivity and the specialty.   Results  The Ct value of templates had a linear relationship with the logstarting quantity. Sensitivity assay showed that the detectionlimit of the assay was 31.6 copies/μl and the standard curve y =-3.122 x + 38.605 had a good reproducibility. Conclusion   Quantitative real-time fluorescence for PUUVdetection was established and characterized by rapidity andsensitivity.

　　Key words:   Puumala virus; Quantitative; Real-timeRT-PCR

　　《中國國境衛生檢疫雜誌》2013年8月刊

相關焦點

  • 應用TaqMan-BHQ探針實時螢光RT-PCR法定量檢測馬秋波病毒核酸
    應用TaqMan-BHQ探針實時螢光RT-PCR法定量檢測馬秋波病毒核酸    燕清麗1 張曉龍1 魏 蓮1 姚李四1，2    （1.中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100123；2.軍事醫學科學院，北京100071）    摘要 〔目的〕 建立一種適應口岸馬秋波病毒實時螢光定量RT-PCR快速的檢測方法。
  • 馬爾堡病毒的實時螢光RT-PCR檢測方法研究
    洪燁，鄭夔，相大鵬，黃吉城，戴俊，師永霞，李小波，幸蘆琴，郭波旋，鄧燕鳳    廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，廣東 廣州　510623    摘要：目的 建立馬爾堡病毒的實時螢光RT-PCR檢測方法。
  • 實時螢光定量PCR的原理及應用
    該方法為45個轉基因動物的同型結合及異質結合提供了明確的鑑定結果。通過實時定量PCR檢測，同型結合的異質接合動物交配後其子代中轉基因的傳遞情況符合孟德爾遺傳規律。這項技術在轉基因動物繁育及基因劑量功能效應實驗中將有很大的用途。③　單核苷酸多態性（SNP）及突變分析：實時螢光定量PCR一個誘人的應用前景是用於檢測基於兩條探針和基因組的不穩定性。
  • 知識點：德國MB螢光定量pcr檢測原理
    螢光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做螢光標記，使PCR擴增後的產物帶有螢光，利用螢光信號的變化和配套軟體，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。本文締一生物為您做以下分析。
  • 實時螢光定量PCR服務
    來源：ChemicalBook背景[1-6]實時螢光定量PCR服務是當今生物學研究的重要手段之一。包括基礎科學、生物技術、醫學研究、法醫學、診斷學等在內的各領域的科學家們使用這種方法進行廣泛的應用研究。
  • 知識點:德國MB螢光定量pcr檢測原理
    螢光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做螢光標記，使PCR擴增後的產物帶有螢光，利用螢光信號的變化和配套軟體，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。本文締一生物為您做以下分析。
  • 實時螢光定量 PCR詳解
    光定量 PCR（Realtime fluorescence quantitative PCR，qPCR）也稱作實時螢光定量 PCR。它是指在 PCR 反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號累積實時檢測整個 PCR 進程，最後通過標準曲線對初始模板進行定量分析的方法。
  • 實時螢光定量PCR技術的應用領域
    定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時螢光定量PCR技術於1996年由美國Applied biosystems公司推出，它是一種在PCR反應體系中加入螢光基團，利用對螢光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
  • 設計實時螢光定量PCR引物方法
    作者：Lemon轉載請註明：解螺旋·臨床醫生科研成長平臺 實時螢光定量PCR是一種在DNA擴增反應中，以螢光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環後產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。實時螢光定量PCR是實驗室最常用的實驗。研究基因在mRNA表達水平,以及驗證基因敲除後下遊靶基因變化情況等等。對於新手來說，如何快速設計引物呢？首先，推薦三個在線設計實時螢光定量PCR引物的網站，不用安裝軟體，直接上網就可搞定。 1.
  • 實時螢光定量 PCR技術原理與應用
    在擴增反應結束之後，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過 放射性核素摻入標記後的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下，我們所感興趣的是未經 PCR 信號放大之前的起始模板量。例如我們想知道某一轉基因動植物轉基因的拷貝數或者某一特定基因在特定組織中的表達量。在這種需求下螢光定量 PCR 技術應運而生。
  • 螢光定量PCR的原理及應用
    PCR擴增反應體系中加入螢光基團，通過對擴增反應中每一個循環產物螢光信號的實時檢測,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。傳統的PCR進行檢測時，擴增反應後需要進行染色處理及電泳分離，並且只能作定性分析，不能準確定量，易造成汙染出現假陽性，使其應用受到限制。實時定量PCR技術不僅實現了對模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無汙染的特點，使得螢光定量PCR逐漸取代常規PCR。
  • 病毒照妖鏡——聚焦實時螢光PCR檢測
    今天我們就從專利視角聚焦實時螢光PCR，為大家揭開其神秘面紗。何為實時螢光PCRPCR（polymerase chainreaction，PCR）即聚合酶鏈式反應，是一種體外酶促合成，擴增特定DNA片段的方法。
  • 實時螢光定量PCR技術
    實時螢光定量PCR技術(Real-time qPCR)是一種在PCR反應體系中加入螢光基團,利用螢光信號積累實時監測整個PCR進程,最後通過特定數學原理對未知模板進行定量分枂的方法。因其定量準確、特異性強、操作快速、簡單、安全丏自動化程度高等特點，現已廣泛應用在臨床、食品、環境、分子生物學、遺傳學、SNP分枂等領域。
  • 螢光定量PCR技術原理，螢光定量PCR的應用有哪些？-菲優特檢測
    螢光定量檢測螢光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為螢光探針和螢光染料。螢光定量PCR的應用分子生物學研究1.核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉基因動植物基因拷貝數的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。2.基因表達差異分析。
  • 助力新冠病毒檢測:螢光定量PCR儀器生產企業匯總
    由於核酸檢測試劑盒需要針對特定的病毒進行單獨研發生產，這就造成了在疫情前期確診病例較少、而後期確診病例直線上升。同時，要做到最終檢測確診病毒，就需要使用到實時螢光定量PCR儀，該設備能否檢測確診病毒的關鍵，其工作狀態如何，將直接影響病毒檢測的效率和精準度。
  • 螢光定量PCR實驗(下) 反轉錄和上機檢測
  • 實時螢光定量PCR實驗(上) RNA抽提
  • 「實時定量PCR技術」主題網絡會議召開
    儀器信息網訊 實時螢光定量PCR技術操作規範性及科學重複性的標準化都有一定難度和可探討性，同時因其可實時監測，定性定量的特性使其在各個領域有著廣泛的應用。基於此，2017年9月26日，儀器信息網舉辦「實時定量PCR技術」主題網絡會議。
  • RT-PCR與qPCR所需要的引物區別
    原理不同：螢光定量PCR實時監測與DNA結合的螢光染料激發的螢光;普通pcr通過檢測插入dna中螢光染色劑來看是否有目的片段。 　　應要求：螢光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp;普通PCR可以擴增長點的片段。螢光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析，普通PCR必須電泳。
  • 乾貨分享 | 螢光定量PCR要點解析
    PCR），是指在PCR擴增反應體系中加入螢光基團，通過對擴增反應中每一個循環產物螢光信號的實時檢測,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時定量PCR技術不僅實現了對模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無汙染的特點，使得螢光定量PCR逐漸取代常規PCR。 在PCR擴增反應的最初數個循環裡，螢光信號變化不大，接近一條直線，這樣的直線即是基線，這條線是可以自動生成也可以手動設置的。