應用TaqMan-BHQ探針實時螢光RT-PCR法定量檢測馬秋波病毒核酸

2020-12-03 中國質量新聞網

    應用TaqMan-BHQ探針實時螢光RT-PCR法定量檢測馬秋波病毒核酸

    燕清麗1 張曉龍1 魏 蓮1 姚李四1，2

    （1.中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100123；2.軍事醫學科學院，北京100071）

    摘要 〔目的〕 建立一種適應口岸馬秋波病毒實時螢光定量RT-PCR快速的檢測方法。〔方法〕用專業軟體設計引物和TaqMan-BHQ探針，以人工合成馬秋波病毒S基因的片段作為模板，進行實時螢光定量RT-PCR研究。〔結果〕模板的Ct值與模板稀釋濃度的對數存在良好的線性關係，標準曲線為Y = -3.281X + 50.975，R2 =0.999361，PCR擴增效率為101.0%，其最低檢出限為28 copies/μl。〔結論〕應用TaqMan-BHQ1探針的實時螢光RT-PCR檢測馬秋波病毒核酸，具有耗時短、靈敏度高等特點。

    關鍵詞 TaqMan-BHQ探針;實時螢光RT-PCR;馬秋波病毒；定量檢測；應用

    〔中圖分類號〕　R512.8 R184.35　〔文獻標識碼〕　B

    Application of TaqMan-BHQ Probe onQuantitative Detection for Machupo Virus by Real-time FluorescenceRT-PCR  Yan Qingli1, Zhang Xiaolong1,Wei Lian1,Yao Lisi1,2(1.Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing100123,China; 2.The Academy of Military Medical Science, Beijing100071,China.)

    [Abstract]   Objective  To establish a rapid and accurate method of real-time fluorescenceRT-PCR to quantify the S gene of Machupo virus. Methods  Thetwin primers and the TaqMan-BHQ probe were designed and synthesizedbased on the S gene segment of Machpo virus. The real-time RT-PCRwas developed for detecting machupo virus. Results   The Ct value of templates had a linearrelationship with the log starting quantity. Sensitivity assayshowed that the detection limit of the assay was 28 copies/μl andthe standard curve Y=-3.281X+50.975 had a goodreproducibility.  Conclusions   Quantitativereal-time fluorescence for Machupo virus detection was establishedand characterized by rapidity and sensitivity.

    [Key words]   TaqMan-BHQ probe;Real-time fluorescence RT-PCR; Machupo virus; Quantitativedetection; Application

   

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